本文關(guān)鍵詞：單增李斯特菌雙組分系統(tǒng)應(yīng)答調(diào)節(jié)蛋白基因RS11565的功能研究

  更多相關(guān)文章： 單增李斯特菌 雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng) RS11565 基因缺失 生物學(xué)特性

【摘要】：單增李斯特菌(Listeria monocytogenges,Lm)是導(dǎo)致人獸共患病-李斯特菌病(Listeriosis)的食源性病原菌。Lm的易感者為免疫缺陷和免疫力低下者。李斯特菌病雖患病率不高,但患病死亡率可達20%~30%。近幾年,我國不斷有人和動物李斯特菌病病例的報道,Lm對我國人民健康的威脅和畜牧業(yè)發(fā)展的影響不容小覷。因此,重視Lm致病機制的研究勢在必行。雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)(TCS)普遍存在于細菌中,與病原菌的毒力因子表達密切相關(guān)。因此,研究Lm的TCS是探究Lm致病機理的重要方面。本研究應(yīng)用生物信息學(xué)方法對Lm的食品分離株LM201的TCS進行了統(tǒng)計和分析,發(fā)現(xiàn)一對TCS--RS11570/RS11565的功能未知。本研究構(gòu)建了調(diào)節(jié)蛋白基因RS11565的突變菌株,考察了突變株的部分生物學(xué)特性,初步探明了該TCS與Lm毒力的相關(guān)性,以期給Lm致病機理補充新的信息。研究工作及其結(jié)果如下。1.LM201基因組TCSs的分析根據(jù)LM201的基因組信息,應(yīng)用生物信息學(xué)方法發(fā)現(xiàn),LM201的TCS數(shù)目為14對HK/RR和2個孤兒RR;HKs包含11種組成結(jié)構(gòu),RRs分屬于7個亞家族;HKs和RRs的進化關(guān)系一致;功能預(yù)測發(fā)現(xiàn)LM201中存在1對功能未知TCS--RS11570/RS11565。2.RS11565基因缺失突變菌株S4070的構(gòu)建以LM201基因組為模板,擴增RS11565上下游同源臂,構(gòu)建了重組自殺質(zhì)粒p3007,電轉(zhuǎn)p3007入LM201,篩選發(fā)生同源重組的轉(zhuǎn)化子,獲得突變菌株S4070。3.突變菌株S4070的生物學(xué)特性對S4070生長曲線和主要生化特性進行了測定,發(fā)現(xiàn)S4070與親本株LM201的生長速率和主要生化特性一致。用線蟲C.elegans N2和小鼠分別對S4070進行了毒力測定。線蟲試驗結(jié)果:LM201組和S4070組線蟲的平均壽命均為12.0 d,E.coli OP50對照組線蟲的平均壽命為15.5 d,LM201組和S4070組線蟲的壽命顯著短于對照組,但LM201組與S4070組間差異不顯著。小鼠試驗結(jié)果:LM201的LD50為1.55×106 CFU,S4070的為4.37×105 CFU,統(tǒng)計分析表明二者的LD50差異不顯著。對S4070進行了小鼠肝臟和脾臟組織載菌量測定。結(jié)果顯示:72h時,肝臟中LM201載菌量為2.76×107~3.64×107 CFU/g,S4070載菌量為1.95×108~3.61×108CFU/g,其顯著高于LM201組;脾臟中S4070與LM201載菌量無顯著性差異。用Caco-2細胞對S4070進行了黏附和侵襲試驗,結(jié)果顯示:與LM201相比,S4070對Caco-2的黏附能力顯著降低,但對Caco-2的侵襲能力無顯著性差異。用RAW264.7細胞對S4070進行了吞噬試驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn)S4070抗RAW264.7的吞噬能力與LM201相比無顯著性差異。
【關(guān)鍵詞】：單增李斯特菌 雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng) RS11565 基因缺失 生物學(xué)特性
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略語表(Abbreviation)10-11
• 1 文獻綜述11-20
• 1.1 單增李斯特菌簡介11-13
• 1.1.1 基本特性11
• 1.1.2 流行病學(xué)特征11-12
• 1.1.3 臨床癥狀12-13
• 1.1.4 治療與防治13
• 1.2 單增李斯特菌毒力因子與侵染細胞機制13-15
• 1.2.1 毒力因子13-14
• 1.2.2 侵染細胞機制14-15
• 1.3 單增李斯特菌雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)15-18
• 1.3.1 雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的基本特性15-16
• 1.3.2 雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的調(diào)控機制16-17
• 1.3.3 雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控17
• 1.3.4 單增李斯特菌雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的研究現(xiàn)狀17-18
• 1.4 生物信息學(xué)在細菌雙組分系統(tǒng)研究中的應(yīng)用18-19
• 1.5 秀麗隱桿線蟲在Lm致病性和毒力研究中的應(yīng)用19-20
• 2 研究目的和意義20-21
• 3 材料與方法21-34
• 3.1 材料21-25
• 3.1.1 菌種和質(zhì)粒21
• 3.1.2 實驗動物和細胞系21-22
• 3.1.3 主要器材22
• 3.1.4 主要試劑22-23
• 3.1.5 主要溶液配制23-24
• 3.1.6 生物信息學(xué)分析軟件24
• 3.1.7 引物24-25
• 3.2 方法25-34
• 3.2.1 LM201雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)預(yù)測25
• 3.2.2 LM201的RS11565基因左右臂的克隆與鑒定25-27
• 3.2.3 重組自殺性質(zhì)粒的構(gòu)建27-29
• 3.2.4 Δ RS11565突變菌株的構(gòu)建29-31
• 3.2.5 Δ RS11565突變菌株生長曲線的測定31
• 3.2.6 Δ RS11565突變菌株生化特性的鑒定31
• 3.2.7 Δ RS11565突變菌株對C. elegans N2的毒力測定31
• 3.2.8 Δ RS11565突變菌株對小鼠的毒力測定31-32
• 3.2.9 Δ RS11565突變菌株對Caco-2 細胞的黏附和侵襲實驗32-33
• 3.2.10 RAW264.7 細胞對Δ RS11565突變菌株的吞噬實驗33-34
• 4 結(jié)果與分析34-56
• 4.1 LM201中TCS的生物信息學(xué)分析34-44
• 4.1.1 LM201中TCSs的統(tǒng)計34-36
• 4.1.2 LM201中組氨酸激酶HK的系統(tǒng)進化樹的構(gòu)建與分析36-37
• 4.1.3 LM201中應(yīng)答調(diào)節(jié)蛋白RR的系統(tǒng)進化樹的構(gòu)建與分析37-38
• 4.1.4 LM201中組氨酸激酶HK的結(jié)構(gòu)域組成與分類38-41
• 4.1.5 LM201中應(yīng)答調(diào)節(jié)蛋白RR的結(jié)構(gòu)域組成與分類41-42
• 4.1.6 LM201的TCSs的功能預(yù)測42-44
• 4.2 LM201中RS11570/RS11565基因結(jié)構(gòu)特征分析44-48
• 4.3 Δ RS11565突變菌株的構(gòu)建48-50
• 4.3.1 同源臂的克隆和氯霉素抗性基因(cat)的擴增48
• 4.3.2 同源臂與cat基因片段的連接48-49
• 4.3.3 重組自殺質(zhì)粒p3007的構(gòu)建與鑒定49
• 4.3.4 Δ RS11565突變菌株的鑒定49-50
• 4.4 Δ RS11565突變菌株生長曲線的測定50-51
• 4.5 Δ RS11565突變菌株生化特性的鑒定51
• 4.6 Δ RS11565突變菌株對C. elegans N2的毒力測定51-53
• 4.7 Δ RS11565突變菌株對小鼠的毒力測定53-54
• 4.7.1 小鼠半數(shù)致死量(LD50)的測定53
• 4.7.2 組織載菌量的測定53-54
• 4.8 Δ RS11565突變菌株對Caco-2 細胞的黏附和侵襲試驗結(jié)果54-55
• 4.9 RAW264.7 細胞吞噬試驗結(jié)果55-56
• 5 討論56-59
• 5.1 突變菌株的構(gòu)建56
• 5.2 RS11565基因的缺失對LM201毒力的影響56-57
• 5.3 RS11570/RS11565雙組分系統(tǒng)的后續(xù)研究展望57-59
• 6 結(jié)論59-60
• 參考文獻60-68
• 致謝68

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 隋建新;林洪;曹立民;王靜雪;王光輝;;單增李斯特菌(Listeria monocytogens)雞卵黃抗體的制備及其抑菌活性研究[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2009年02期

2 田霞;李遠釗;張培正;朱英蓮;;即食菜卷和肉湯中單增李斯特菌生長模型及控制研究[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2005年10期

3 王海艷;劉中學(xué);石新華;趙林立;劉虹;甄宏太;;單增李斯特菌及其表面蛋白的研究進展[J];檢驗檢疫科學(xué);2006年02期

4 郭明星;朱堂明;郭愛珍;陳晨;趙暉;王振華;陳建軍;徐新生;;湖北省水產(chǎn)品中單增李斯特菌基因分型研究[J];中國人獸共患病學(xué)報;2008年09期

5 梁啟平;陳健舜;陳巧妙;勞華均;黃紹棠;方維煥;;進口水產(chǎn)品中單增李斯特菌的分子流行病學(xué)特點[J];微生物學(xué)報;2009年06期

6 楊松;曲祖乙;劉永華;;單增李斯特菌定量檢測方法研究[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2012年23期

7 聞一鳴;李志清;童吉宇;向軍儉;;免疫磁珠富集技術(shù)聯(lián)合選擇性培養(yǎng)基快速檢測單增李斯特菌[J];生物工程學(xué)報;2013年05期

8 于佳佳;鄧興梅;蔣建軍;朱江虹;馬勛;;單增李斯特菌新疆臨床分離株毒力基因的克隆和序列分析[J];石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年02期

9 陸海霞;黃小鳴;朱軍莉;;超高壓對單增李斯特菌細胞膜的損傷和致死機理[J];微生物學(xué)報;2014年07期

10 葉正興;王艷;李培京;劉凱;葉長蕓;;單增李斯特菌1/2a血清型菌株生物膜形成能力及相關(guān)基因差異研究[J];中國人獸共患病學(xué)報;2013年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龍軼;周小明;邢達;;基于磁珠分離和超分支滾環(huán)擴增的單增李斯特菌電化學(xué)發(fā)光檢測[A];第七屆全國光生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

2 丁建英;韓劍眾;;食品中單增李斯特菌的存在現(xiàn)狀及檢測方法研究進展[A];中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會第五屆年會暨第四屆東西方食品業(yè)高層論壇論文摘要集[C];2007年

3 張耀祺;石磊;;分離自生肉的單增李斯特菌的血清型及脈沖場凝膠電泳分型研究[A];“亞運食品安全與廣東食品產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新發(fā)展”學(xué)術(shù)研討會暨2009年廣東省食品學(xué)會年會論文集[C];2009年

4 陳慧燕;;單增李斯特菌室間比對活動實驗室結(jié)果評價[A];2009年衛(wèi)生檢驗新技術(shù)學(xué)術(shù)研討會會刊[C];2009年

5 陳健舜;方維煥;;食品中單增李斯特菌的分子流行病學(xué)特征與致病力研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2009學(xué)術(shù)年會論文集（下冊）[C];2009年

6 鄭華英;江元山;呂均;熊燕;龍一兵;曾瑩春;;單增李斯特菌食品分離株多重PCR鑒定分型[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

7 何冬梅;王洪敏;柯昌文;鄧小玲;楊杏芬;賴蔚傮;柯碧霞;李柏生;譚海玲;;單增李斯特菌檢測基因芯片的研制與評價[A];2011廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2011年

8 斯國靜;俞驊;劉濤;胡俊;;單核細胞增生李斯特菌在市售食品中污染現(xiàn)狀分析[A];2011年浙江省醫(yī)學(xué)會醫(yī)學(xué)病毒學(xué)分會、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)分會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

9 郭明星;朱堂明;陳晨;趙暉;王振華;陳建軍;徐新生;;湖北省水產(chǎn)品中單增李斯特菌基因分型研究[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

10 程超男;張笑言;彭媛;白家磊;劉原媛;寧保安;高志賢;;基于3-巰基丙酸修飾金電極構(gòu)建電化學(xué)免疫傳感器檢測牛奶中的單增李斯特菌[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第三十三屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 ;重視單增李斯特菌風(fēng)險防范[N];中國醫(yī)藥報;2014年

2 張啟華邋姜文輝;煙臺首次從進口水產(chǎn)品中檢出單增李斯特菌[N];中國國門時報;2007年

3 記者　 胡其峰;進口日本食品連續(xù)出現(xiàn)質(zhì)量問題[N];光明日報;2006年

4 黃全權(quán);進口日本食品連出問題,質(zhì)檢交涉[N];新華每日電訊;2006年

5 夏文俊;進口日本食品連續(xù)出現(xiàn)質(zhì)量問題[N];中國質(zhì)量報;2006年

6 呂壯;日本輸華食品頻現(xiàn)安全問題[N];中華工商時報;2006年

7 高亞蘭;小心：進口日本食品頻現(xiàn)質(zhì)量問題[N];國際商報;2006年

8 記者　黃全權(quán);進口日本食品連續(xù)出現(xiàn)問題[N];人民日報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方春;單核細胞增生李斯特菌譜系Ⅲ強毒株與弱毒菌株比較基因組及致病力差異機制[D];浙江大學(xué);2015年

2 亢春雨;食源性單核增生性李斯特氏菌的分布、遺傳多態(tài)性及其毒理機制研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 張一敏;三種有機酸對單增李斯特菌誘導(dǎo)性耐酸響應(yīng)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 李長城;三文魚魚籽中單增李斯特菌預(yù)測模型建立及控制研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

5 夏葉;單核細胞增生李斯特菌：應(yīng)激轉(zhuǎn)錄組學(xué)與RsbX對SigB表達和細菌存活的調(diào)控[D];浙江大學(xué);2015年

6 郗遠;植物提取物對單增李斯特菌的抑制作用及乳化香腸的品質(zhì)影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 王建鋒;抗單核細胞增多性李斯特菌溶血素化合物的發(fā)現(xiàn)及作用機制研究[D];吉林大學(xué);2015年

8 隋建新;單增李斯特菌雞卵黃抗體的抑菌性能及其機理研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

9 田靜;熟肉制品中單增李斯特菌的風(fēng)險評估及風(fēng)險管理措施的研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2010年

10 張輝;單增李斯特菌ActA的表達、免疫原性及膠體金試紙研制[D];吉林大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馮曉慧;單增李斯特菌在肉牛屠宰過程中的流行特點及其熱失活模型的建立[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 于旖斯;食品中單增李斯特菌的分離、鑒定及抑制研究[D];大連工業(yè)大學(xué);2010年

3 王昊宇;食品中單增李斯特菌的分離鑒定及PCR快速檢測方法的研究[D];大連工業(yè)大學(xué);2013年

4 周旋;姜黃素抑制單增李斯特菌溶血素活性的分子機制研究[D];吉林大學(xué);2016年

5 張星星;漆黃素對單增李斯特菌感染妊娠小鼠流產(chǎn)的保護作用[D];吉林大學(xué);2016年

6 解新方;單增李斯特菌表面增強拉曼光譜檢測技術(shù)研究[D];天津科技大學(xué);2015年

7 李云霞;納米磁珠對單增李斯特菌低場磁共振檢測的影響研究[D];上海師范大學(xué);2016年

8 歐婭;單增李斯特菌雙組分系統(tǒng)應(yīng)答調(diào)節(jié)蛋白基因RS11565的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

9 王艷;模擬標本中單增李斯特菌real-time PCR檢測方法的建立及單增李斯特菌多位點序列分型[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2009年

10 梁啟平;進口水產(chǎn)品中單增李斯特菌的監(jiān)測與風(fēng)險分析[D];浙江大學(xué);2009年

，

本文編號：576432