本文關(guān)鍵詞：山羊痘病毒感染過程中ova-miR-34a-5p的動(dòng)態(tài)表達(dá)及其靶標(biāo)鑒定

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【摘要】：MicroRNAs(miRNAs)分子是一類短小(長度約為22 nt)的內(nèi)源性非編碼小RNA分子,廣泛的存在于動(dòng)植物以及病毒中。該分子可以通過抑制目標(biāo)蛋白mRNA翻譯或促使其降解進(jìn)行靶標(biāo)蛋白表達(dá)的調(diào)控,在多種復(fù)雜生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用。研究表明miRNAs分子在病毒感染過程中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能,可以作為有效控制疾病的靶標(biāo)。因此,本研究選取在山羊痘病毒感染的羔羊睪丸細(xì)胞中差異表達(dá)的ova-miR-34a-5p分子,研究其在山羊痘病毒感染過程中的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況,預(yù)測(cè)并驗(yàn)證其靶標(biāo)分子,為闡明miRNAs分子在羊痘病毒感染過程中發(fā)揮的作用奠定了基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)選取前期通過下一代高通量測(cè)序技術(shù)篩選出的在山羊痘病毒感染羔羊睪丸細(xì)胞4h時(shí)差異表達(dá)的ova-miR-34a-5p,利用實(shí)時(shí)定量熒光PCR(Q-PCR)技術(shù)驗(yàn)證山羊痘病毒感染羔羊睪丸細(xì)胞Oh、0.5h、4h、10h、24h和48h六個(gè)感染時(shí)間點(diǎn)的ova-miR-34a-5p的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況；利用TargetScan數(shù)據(jù)庫、RNA22數(shù)據(jù)庫和miRanda數(shù)據(jù)庫進(jìn)行ova-miR-34a-5p靶標(biāo)基因的預(yù)測(cè),并通過Gene Onthology(GO)注釋及Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)信號(hào)通路富集分析方法對(duì)預(yù)測(cè)靶標(biāo)基因進(jìn)行相關(guān)生物信息學(xué)分析；采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)預(yù)測(cè)的靶標(biāo)基因進(jìn)行驗(yàn)證。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：(1)與山羊痘病毒感染0h相比,ova-miR-34a-5p的表達(dá)水平在感染0.5h、4h和10h時(shí)沒有明顯變化(P0.05),而在感染24h時(shí)明顯升高(P0.05),之后在感染48h時(shí)又有所下降(P0.05),提示它可能與病毒的DNA合成有一定的聯(lián)系。(2)采用TargetScan數(shù)據(jù)庫、RNA22數(shù)據(jù)庫和miRanda數(shù)據(jù)庫進(jìn)行靶標(biāo)分子的預(yù)測(cè),對(duì)于所得預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)取交集共計(jì)得到599個(gè)ova-miR-34a-5p的靶標(biāo)分子,分子功能主要涉及蛋白質(zhì)結(jié)合,生物學(xué)過程主要富集在轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞增殖及細(xì)胞定位等。綜合ova-miR-34a-5p的靶標(biāo)分子預(yù)測(cè)結(jié)果及其在病毒感染過程中的表達(dá)變化,我們選取轉(zhuǎn)錄因子mycn進(jìn)行進(jìn)一步的靶標(biāo)分子驗(yàn)證。(3)利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng),構(gòu)建野生型和突變型重組質(zhì)粒進(jìn)行靶標(biāo)基因的驗(yàn)證。結(jié)果顯示,mycn-WT(野生型)+ova-miR-34a-5p類似物共轉(zhuǎn)染組與mycn-WT(野生型)+陰性共轉(zhuǎn)染對(duì)照組相比差異極顯著(P0.01),其相對(duì)表達(dá)量約為對(duì)照組的0.65,而mycn-mut(突變型)+ova-miR-34a-5p類似物共轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組相比差異不顯著(P0.05),表明ova-miR-34a-5p可以抑制轉(zhuǎn)錄因子mycn的表達(dá)。結(jié)論：ova-miR-34a-5p的表達(dá)量在病毒感染24h時(shí)明顯升高,其可能通過調(diào)節(jié)mycn的表達(dá)水平影響病毒DNA合成,但其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：ova-miR-34a-5p 山羊痘病毒 mycn
【學(xué)位授予單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.654
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略詞英文對(duì)照表10-13
• 第一章 引言13-27
• 1.1 羊痘病毒概述13-15
• 1.2 miRNA的分子特征及在動(dòng)物中的合成15-18
• 1.3 miRNA在HIV-1病毒感染過程中的作用18-21
• 1.4 miRNA的主要檢測(cè)方法21-23
• 1.4.1 Northern blotting雜交21
• 1.4.2 miRNA芯片21
• 1.4.3 Q-PCR(real time quantitative PCR)21-22
• 1.4.4 高通量測(cè)序22-23
• 1.5 靶基因預(yù)測(cè)方法23-25
• 1.6 研究目的與意義25-27
• 第二章 羊痘病毒感染過程中ova-miR-34a-5p的動(dòng)態(tài)表達(dá)27-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料27-28
• 2.1.1 主要試劑27
• 2.1.2 主要儀器27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-32
• 2.2.1 羔羊睪丸(LT)細(xì)胞培養(yǎng)28-29
• 2.2.2 LT細(xì)胞的接毒與收毒29
• 2.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR(Q-PCR)反應(yīng)29-32
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-37
• 2.3.1 提取的樣品總RNA質(zhì)量檢測(cè)32-35
• 2.3.2 引物質(zhì)量及內(nèi)參基因檢測(cè)35-36
• 2.3.3 ova-miR-34a-5p在病毒感染過程中表達(dá)量變化的驗(yàn)證36-37
• 2.4 討論37-38
• 第三章 mir-34a及其靶標(biāo)基因的生物信息學(xué)分析38-51
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料38
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法38-39
• 3.2.1 mir-34a序列的獲得38-39
• 3.2.2 系統(tǒng)發(fā)生分析39
• 3.2.3 靶基因預(yù)測(cè)39
• 3.2.4 靶基因功能分析39
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析39-49
• 3.3.1 mir-34a的序列保守性及在基因組中的定位39-41
• 3.3.2 系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建41-42
• 3.3.3 靶基因預(yù)測(cè)42-45
• 3.3.4 靶基因功能分析45-49
• 3.4 討論49-51
• 第四章 ova-miR-34a-5p的靶基因mycn的初步鑒定51-66
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料51-52
• 4.1.1 細(xì)胞、菌種和試劑51-52
• 4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)器材52
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法52-59
• 4.2.1 LT細(xì)胞總RNA的提取52
• 4.2.2 mycn 3’UTR序列的克隆52-54
• 4.2.3 雙熒光素酶報(bào)告基因重組載體的構(gòu)建54-58
• 4.2.4 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)58-59
• 4.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理59
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析59-64
• 4.3.1 總RNA提取質(zhì)量檢測(cè)59-60
• 4.3.2 mycn 3'UTR序列擴(kuò)增結(jié)果60-61
• 4.3.3 雙熒光素酶報(bào)告基因重組載體的構(gòu)建與鑒定61-62
• 4.3.4 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)62-64
• 4.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理64
• 4.4 討論64-66
• 第五章 全文結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-75
• 致謝75-76
• 個(gè)人簡介76

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9 丁明孝;付宏蘭;王梅;翟中和;向德林;周青山;;山羊痘病毒形態(tài)發(fā)生過程的電子顯微鏡研究[J];微生物學(xué)報(bào);1986年01期

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1 許樂仁;周碧君;陰正興;何光志;劉忠偉;;山羊痘病變的超微病理學(xué)觀察[A];第二屆貴州省自然科學(xué)優(yōu)秀學(xué)術(shù)論文評(píng)選獲獎(jiǎng)?wù)撐募?007年）[C];2007年

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10 許樂仁;周碧君;陰正興;;有髓神經(jīng)纖維被山羊痘病毒侵犯的證實(shí)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2006年

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1 海崗;表達(dá)FMDV vp1基因和山羊γ-干擾素基因的重組山羊痘病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

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3 張強(qiáng);表達(dá)亞洲1型口蹄疫病毒P1-2A3C基因的山羊痘病毒弱毒株構(gòu)建及其復(fù)制非必需區(qū)篩選[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2007年

4 程振濤;山羊痘病毒某些生物學(xué)特性及其主要結(jié)構(gòu)蛋白P32基因的研究[D];貴州大學(xué);2009年

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1 鄧朝陽;廣西山羊痘防控研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

2 高澤乾;山羊痘病毒感染細(xì)胞microRNAs的篩選、鑒定及其在早期診斷中的應(yīng)用初探[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

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6 程松;大熊貓犬瘟熱病毒H、F基因重組山羊痘病毒的構(gòu)建和鑒定[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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8 黃夏;山羊痘病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性的研究[D];廣西大學(xué);2006年

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