本文關(guān)鍵詞：基因Ⅶd亞型新城疫病毒感染La Sota疫苗免疫雞引起的免疫器官損傷及其對疫苗免疫效果的影響

  更多相關(guān)文章： 基因Ⅶd亞型新城疫病毒 免疫雞 侵嗜性 免疫應(yīng)答

【摘要】：基因Ⅶd亞型新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)是亞洲和非洲很多國家和地區(qū)的優(yōu)勢流行株。傳統(tǒng)疫苗(La Sota)雖然能降低死亡率和發(fā)病率,但免疫雞群中仍有基因Ⅶd亞型NDV的感染,且病毒仍可對免疫器官造成病理損傷。目前為止,免疫雞群感染Ⅶd亞型NDV后免疫器官產(chǎn)生損傷的生物學(xué)效應(yīng)機(jī)制還不明確。本研究首先用基因Ⅶd亞型NDV JS5/05株和早期基因Ⅸ型NDV F48E8兩株強毒株進(jìn)行免疫雞體內(nèi)感染試驗,比較了病毒在雞主要免疫器官中的復(fù)制能力及其引起的病理變化、T淋巴細(xì)胞亞群比例變化和細(xì)胞因子應(yīng)答情況。其次,為了評價免疫雞感染基因Ⅶd亞型NDV后免疫器官損傷對免疫應(yīng)答的影響,我們在基因Ⅶd亞型NDV JS5/05株感染免疫雞后,分別接種了AI滅活疫苗及IBD弱毒疫苗,并在疫苗接種后定期檢測血清中特異性抗體水平,比較了試驗組與對照組之間的抗體效價的差異。1、La Sota疫苗免疫雞感染基因VIId亞型NDV產(chǎn)生免疫器官損傷的機(jī)制本研究用基因Ⅶd亞型NDV JS5/05株和基因Ⅸ型NDV F48E8株分別感染La Sota疫苗免疫雞,于感染后第3,5和7天采集肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胸腺、法氏囊及十二指腸,比較了病毒在組織中引起的病理變化及病毒復(fù)制情況。我們發(fā)現(xiàn)兩株病毒感染免疫雞后對免疫器官的損傷存在顯著差異�；颌鱠亞型NDV JS5/05株感染對免疫器官的損傷表現(xiàn)為脾臟腫大和胸腺出血等病變,組織病理學(xué)結(jié)果顯示脾臟及胸腺中淋巴細(xì)胞變性壞死,動脈周圍淋巴鞘淋巴細(xì)胞減少,法氏囊有少量異嗜性粒細(xì)胞浸潤；而F48E8感染后免疫器官沒有明顯的眼觀病變。病毒載量測定結(jié)果顯示,感染后第5天,JS5/05株在脾臟、胸腺及法氏囊中的復(fù)制水平高于F48E8株,其中兩株病毒在脾臟和胸腺中的含量存在顯著差異(P0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞亞群比例結(jié)果顯示,JS5/05株感染后7天脾臟及胸腺中CD4+T淋巴細(xì)胞比例和CD4+/CD8+比值顯著低于F48E8組(P0.05),而CD8+T淋巴細(xì)胞水平顯著高于F48E8組(P0.05)。細(xì)胞因子測定結(jié)果顯示,在感染后第3,5及7天時,J85/05株誘導(dǎo)的IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IFN-β、IFN-γ和LITAF的表達(dá)水平均顯著高于F48E8感染組(P0.05)。說明基因VIId亞型NDV在免疫器官中的高效復(fù)制,刺激產(chǎn)生過激的先天性免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng),結(jié)果共同造成了免疫器官中嚴(yán)重的病理損傷。2、基因VlId亞型NDV感染La Sota疫苗免疫雞后對疫苗免疫效果的影響為了評價La Sota疫苗免疫雞感染基因Ⅶd亞型NDV后免疫器官損傷對免疫應(yīng)答的影響,本研究以基因Ⅶd亞型NDV JS5/05株攻擊免疫雞后5天,分別接種禽流感(Avian influenza, AI)滅活疫苗及傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease, IBD)弱毒疫苗作為試驗組,同時分別設(shè)AI或IBD疫苗免疫組作為對照組。免疫后定期采血,測定試驗雞血清中的抗體水平,以血凝抑制試驗(hemagglutination inhibition, HI)檢測血清中AI的抗體滴度；以酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測血清中IBD的抗體滴度。結(jié)果顯示,免疫雞感染基因Ⅶd亞型NDV JS5/05株后,滅活疫苗和弱毒疫苗產(chǎn)生的抗體水平均顯著低于相應(yīng)的免疫對照組。試驗組AI抗體滴度在整個試驗期明顯低于免疫對照組,免疫后2周試驗組與免疫對照組的結(jié)果分別為6.75+0.96log2和5.50+0.58 log2,差異顯著(P0.05)。試驗組IBD抗體滴度在免疫后1,2和3周時分別為459.03±1036.04、5133.13±1071.97、3868.62±960.95,而免疫對照組的結(jié)果分別為2015.91±1792.24、7547.81±1012.38、7137.09±1526.90,兩組在免疫后1周存在顯著差異(P0.05),在免疫后2及3周時差異極顯著(P0.01)。以上結(jié)果顯示,免疫雞群感染基因VIId亞型NDV后,可引起免疫抑制效應(yīng),對后續(xù)疫苗免疫效果產(chǎn)生影響,且這種抑制作用對于弱毒疫苗更為明顯。
【關(guān)鍵詞】：基因Ⅶd亞型新城疫病毒 免疫雞 侵嗜性 免疫應(yīng)答
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 符號說明10-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-25
• 1 新城疫及新城疫病毒概述12-15
• 1.1 新城疫及新城疫病毒12
• 1.2 新城疫病毒的致病性12-13
• 1.3 新城疫病毒流行歷史及我國流行現(xiàn)狀13-14
• 1.4 基因Ⅶ型NDV對雞的致病性研究進(jìn)展14-15
• 2 家禽對新城疫病毒的免疫應(yīng)答15-19
• 2.1 家禽對NDV的天然免疫應(yīng)答15-16
• 2.2 家禽對NDV的體液免疫應(yīng)答16-17
• 2.3 家禽對NDV的細(xì)胞免疫應(yīng)答17-19
• 參考文獻(xiàn)19-25
• 第二章 La Sota疫苗免疫雞感染基因Ⅶd亞型NDV產(chǎn)生免疫器官損傷的機(jī)制25-46
• 1 材料26-27
• 1.1 疫苗與毒株26
• 1.2 雞胚及試驗動物26
• 1.3 主要試劑與儀器26-27
• 2 方法27-31
• 2.1 疫苗的制備27
• 2.2 試驗雞的免疫及分組27
• 2.3 攻毒株滴度測定27-28
• 2.4 免疫雞攻毒28
• 2.5 臟器病毒載量測定及病理切片制備28-30
• 2.6 免疫器官T細(xì)胞亞群比例及細(xì)胞因子基因表達(dá)檢測30-31
• 3 結(jié)果31-40
• 3.1 臨床癥狀及大體病理變化31-32
• 3.2 組織病理學(xué)變化32-34
• 3.3 qRT-PCR技術(shù)檢測臟器中病毒含量34-36
• 3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測免疫器官T淋巴細(xì)胞亞群比例36-38
• 3.5 qRT-PCR技術(shù)檢測免疫器官中相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)38-40
• 4 討論40-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 第三章 基因Ⅶd亞型NDV感染La Sota疫苗免疫雞后對疫苗免疫效果的影響46-57
• 1 材料47-48
• 1.1 病毒47
• 1.2 疫苗47
• 1.3 試驗動物47
• 1.4 主要試劑47
• 1.5 主要儀器47-48
• 2 方法48-50
• 2.1 試驗雞的免疫及分組48-49
• 2.2 血清的制備49
• 2.3 HI試驗檢測血清中AI抗體49
• 2.4 ELISA檢測血清中IBD抗體49
• 2.5 試驗數(shù)據(jù)分析49-50
• 3 結(jié)果50-52
• 3.1 免疫雞感染基因Ⅶd型NDV對IBD疫苗免疫效果的影響50-51
• 3.2 免疫雞感染基因Ⅶd型NDV對AI疫苗免疫效果的影響51-52
• 4 討論52-54
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 全文小結(jié)57-58
• 致謝58-59

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：547251