本文關(guān)鍵詞：馬鏈球菌誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞Toll樣受體及細(xì)胞因子表達(dá)的研究

  更多相關(guān)文章： 馬鏈球菌馬亞種 Toll樣受體 細(xì)胞因子 RAW264.7細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞

【摘要】：樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cells,DCs)和巨噬細(xì)胞(Macrophages,MΦs)是馬鏈球菌馬亞種(Streptococcus equi subspecies equi,S.equi)感染的主要宿主細(xì)胞。當(dāng)細(xì)菌進(jìn)入機(jī)體后會(huì)被細(xì)胞表面的模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors,PRRs)識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)不同的信號(hào)通路途徑,啟動(dòng)細(xì)胞因子的表達(dá),參與炎癥反應(yīng)。為探究Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)介導(dǎo)的信號(hào)通路在S.equi感染宿主細(xì)胞中的作用,本研究主要開展了以下兩個(gè)方面的工作:(1)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),分析S.equi的感染對(duì)RAW264.7細(xì)胞TLRs、髓樣分化因子88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)及細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的影響。結(jié)果顯示,S.equi感染RAW264.7細(xì)胞后6 h,TLR1、TLR2、TLR6與MyD88 mRNA表達(dá)水平較未感染組變化不明顯;感染后12 h,TLR1、TLR2和TLR6 mRNA表達(dá)水平未出現(xiàn)變化,而MyD88 mRNA表達(dá)水平高于未感染組;感染后24 h,TLR1、TLR2、TLR6、IL-10和IL-12 mRNA表達(dá)水平出現(xiàn)明顯升高,但是IL-1、IL-6和TNF-αmRNA表達(dá)水平均顯著下降。結(jié)果表明,TLRs介導(dǎo)的信號(hào)通路參與S.equi感染RAW264.7細(xì)胞的免疫應(yīng)答反應(yīng)。(2)利用GM-CSF、IL-4刺激小鼠骨髓細(xì)胞使其分化為DCs,S.equi感染DCs后16、20、26 h,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞TLRs、MyD88和細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,S.equi感染DCs后16、20、26 h,TLR1、TLR2、TLR6、MyD88 mRNA表達(dá)水平均高于未感染組。S.equi感染DCs后16、26 h,IL-1 mRNA表達(dá)水平較未感染組變化不明顯,IL-10和TNF-αmRNA表達(dá)水平明顯升高。IL-6在S.equi感染DCs后16 h,mRNA表達(dá)水平顯著上升,但感染后26 h變化不明顯。IL-12在S.equi感染DCs后16 h,mRNA表達(dá)水平?jīng)]有變化,但感染后26 h有所升高。通過(guò)TLR2阻斷型抗體對(duì)DCs進(jìn)行預(yù)處理,分別應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法分析TLR2的缺失對(duì)DCs成熟標(biāo)記分子CD80、CD86、MHCII及細(xì)胞因子表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,TLR2的缺失不能阻斷DCs CD80、CD86、MHCII的表達(dá),但是可以顯著抑制IL-6、IL-12 mRNA表達(dá)水平。結(jié)果表明,S.equi具有調(diào)節(jié)DCs TLRs、MyD88和細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的能力,并且S.equi誘導(dǎo)DCs產(chǎn)生IL-6和IL-12可能是依賴TLR2信號(hào)通路。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)S.equi能夠影響RAW264.7細(xì)胞和DCs TLRs、MyD88和細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)水平,并且DCs分泌IL-6和IL-12是通過(guò)TLR2介導(dǎo)的信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)。這些研究可為明確S.equi與靶細(xì)胞之間的相互作用提供試驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：馬鏈球菌馬亞種 Toll樣受體 細(xì)胞因子 RAW264.7細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.61
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 英文縮略表9-10
• 第1章 緒論10-21
• 1.1 馬腺疫的研究概況10-13
• 1.1.1 馬腺疫對(duì)馬屬動(dòng)物的危害10
• 1.1.2 馬腺疫的致病因素10-12
• 1.1.3 馬腺疫的流行情況12-13
• 1.2 Toll樣受體信號(hào)通路13-17
• 1.2.1 Toll樣受體13-15
• 1.2.2 依賴MyD88信號(hào)通路/不依賴MyD88信號(hào)通路15-16
• 1.2.3 Toll樣受體信號(hào)通路中細(xì)胞因子的分泌16-17
• 1.3 巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞在鏈球菌免疫中的作用17-19
• 1.3.1 巨噬細(xì)胞的生物學(xué)特性17
• 1.3.2 樹突狀細(xì)胞的生物學(xué)特性17-18
• 1.3.3 巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞與鏈球菌之間的相互作用18-19
• 1.4 研究目的及意義19-21
• 第2章 馬鏈球菌感染對(duì)RAW264.7 細(xì)胞TLR1、TLR2、TLR6、MyD88及細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響21-35
• 2.1 材料21-22
• 2.1.1 菌種和細(xì)胞株21-22
• 2.1.2 主要試劑22
• 2.1.3 主要儀器22
• 2.2 方法22-28
• 2.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成22-23
• 2.2.2 RAW264.7 細(xì)胞的培養(yǎng)23
• 2.2.3 細(xì)胞總RNA的提取23-24
• 2.2.4 cDNA的制備24
• 2.2.5 陽(yáng)性質(zhì)粒的構(gòu)建24-27
• 2.2.6 熔解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備27
• 2.2.7 RAW264.7 細(xì)胞的S.equi感染27
• 2.2.8 目的基因mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)27-28
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28
• 2.3 結(jié)果28-32
• 2.3.1 陽(yáng)性質(zhì)粒的鑒定28
• 2.3.2 目的基因的熔解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線28-31
• 2.3.3 S.equi的感染對(duì)RAW264.7 細(xì)胞TLR1、TLR2、TLR6和MyD88 mRNA表達(dá)的影響31
• 2.3.4 S.equi的感染對(duì)RAW264.7 細(xì)胞細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響31-32
• 2.4 討論32-35
• 第3章 TLRs介導(dǎo)的信號(hào)通路在馬鏈球菌感染小鼠樹突狀細(xì)胞中的作用35-46
• 3.1 材料36-37
• 3.1.1 菌種和細(xì)胞株36
• 3.1.2 主要試劑36
• 3.1.3 主要儀器36-37
• 3.2 方法37-39
• 3.2.1 BMDCs的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)37
• 3.2.2 BMDCs表型的流式細(xì)胞分析37
• 3.2.3 S.equi感染BMDCs37
• 3.2.4 目的基因mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)37-38
• 3.2.5 TLR2在S.equi誘導(dǎo)BMDCs表達(dá)表面分子中的作用38
• 3.2.6 TLR2在S.equi誘導(dǎo)BMDCs分泌細(xì)胞因子中的作用38
• 3.2.7 數(shù)據(jù)分析38-39
• 3.3 結(jié)果39-43
• 3.3.1 BMDCs形態(tài)及表型的鑒定39-40
• 3.3.2 S.equi的感染對(duì)BMDCs TLR1、TLR2、TLR6和MyD88 mRNA表達(dá)的影響40
• 3.3.3 S.equi的感染對(duì)BMDCs IL-1、IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α mRNA表達(dá)的影響40-41
• 3.3.4 TLR2在S.equi誘導(dǎo)BMDCs表達(dá)表面分子中的作用41-42
• 3.3.5 TLR2在S.equi誘導(dǎo)BMDCs分泌細(xì)胞因子中的作用42-43
• 3.4 討論43-46
• 第4章 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-59
• 致謝59-60
• 作者簡(jiǎn)介60

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