本文關(guān)鍵詞：狐、貉、貂源偽狂犬病毒分離鑒定及gC基因表達

  更多相關(guān)文章： 狐 貉 貂 偽狂犬病毒 gC基因

【摘要】：偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的一種多種動物共患的烈性傳染病。其臨床癥狀主要表現(xiàn)為發(fā)熱、奇癢、呼吸困難、母畜不孕、流產(chǎn)、死胎等。自2011年末疑似PR在我國遼寧、河北、山東等地的毛皮動物中大量出現(xiàn),造成了嚴重的經(jīng)濟損失。為了探尋病原學依據(jù),從患病狐、貉、貂腦組織病料中分離到Fox1、Rac1、Mink1等多株P(guān)RV,并對其生物學特性進行了系統(tǒng)研究。發(fā)現(xiàn)分離毒株接種MDCK細胞均呈現(xiàn)出皰疹病毒特征的細胞病變。通過電鏡,可觀察到100~180 nm帶有囊膜的病毒粒子。攻毒家兔和小白鼠均表現(xiàn)出典型的PR癥狀,并從腦組織中再次檢測到PRV gB基因,證明分離病毒為PRV。進一步對Fox1、Rac1和Mink1株的生物學特性進行研究,發(fā)現(xiàn)其在MDCK細胞上的TCID50可達10-7.83/mL~10-7.5/mL,對氯仿和胰酶敏感,在pH5~pH9的環(huán)境中穩(wěn)定,對熱具有較強的耐受性。測定Rac1對小鼠的LD50為10-4.8/mL。通過分子流行病學分析發(fā)現(xiàn)本試驗獲得的狐、貉、貂源毒株與CLW2014-1株、TJ株、ZJ01株等近年來分離的豬源變異強毒株親緣關(guān)系最近。并且在Rac1株gE蛋白48位、497位和gC蛋白63~69位,觀察到了變異毒株特有的3處標志性插入。表明造成此次狐、貉、貂PR流行的毒株并非疫苗株或國內(nèi)早期流行毒株,而極有可能是近年來新出現(xiàn)的PRV變異株,這為我國狐、貉、貂PR的防控提供了參考和依據(jù)。設(shè)計特異性引物,擴增PRV Rac1株gC基因膜外區(qū),克隆至原核表達載體pET-32a的T7啟動子下游和pGEX-6p-1的Tac啟動子下游,構(gòu)建gC-His和gC-Gst重組表達載體,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中,IPTG誘導(dǎo)表達,經(jīng)Western blot鑒定成功獲得目的蛋白,表達產(chǎn)物分子量大小分別為70 kDa和76 kDa。表明成功表達gC膜外區(qū)蛋白,為進一步的免疫學研究,新型診斷和治療方法的建立奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：狐 貉 貂 偽狂犬病毒 gC基因
【學位授予單位】：河北科技師范學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 縮略詞4-5
• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 第一章 緒論9-22
• 1.1 偽狂犬病毒9-18
• 1.1.1 PRV的結(jié)構(gòu)特點9-14
• 1.1.2 PRV增殖循環(huán)14-16
• 1.1.3 免疫逃避機制16
• 1.1.4 潛伏感染16-18
• 1.1.5 抑制細胞凋亡18
• 1.2 狐、貉、貂PR18-19
• 1.3 疫苗和檢測方法19-21
• 1.4 本研究的目的和意義21-22
• 第二章 材料與方法22-34
• 2.1 主要試劑22
• 2.2 主要儀器及耗材22-23
• 2.3 主要配方23-25
• 2.4 試驗方法25-34
• 2.4.1 病料采集25
• 2.4.2 病理切片25-26
• 2.4.3 病毒分離純化26
• 2.4.4 電鏡觀察26
• 2.4.5 病毒生長曲線26-27
• 2.4.6 理化性質(zhì)27
• 2.4.7 致病性試驗27
• 2.4.8 PCR擴增27-28
• 2.4.9 分子流行病學分析28-30
• 2.4.10 gE、gC全基因分析30
• 2.4.11 重組菌構(gòu)建30-32
• 2.4.13 蛋白表達32-34
• 第三章 結(jié)果34-59
• 3.1 臨床檢驗34-35
• 3.2 病毒在組織內(nèi)分布35-36
• 3.3 病理切片36-37
• 3.4 病毒的分離純化37-38
• 3.5 電鏡觀察38
• 3.6 生長曲線38-39
• 3.7 理化特性39
• 3.8 動物試驗39-40
• 3.9 分子流行病學分析40-42
• 3.10 gE、gC全基因分析42-50
• 3.11 gC蛋白原核表達載體構(gòu)建50-54
• 3.12 gC蛋白表達純化54-57
• 3.13 Western驗證57-59
• 第四章 討論59-63
• 第五章 結(jié)論63-64
• 參考文獻64-73
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明73-74
• 致謝74

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉博濤;宋昌軍;劉翊中;;偽狂犬病毒致病機理的研究進展[J];西北民族大學學報(自然科學版);2008年04期

2 彭蕓蕓;仲曉寧;李春蕾;;偽狂犬病毒載體的研究進展[J];山東畜牧獸醫(yī);2013年05期

3 丁建華,付烈振,王家富,羅滿林,謝小虎,張楚瑜;偽狂犬病毒表達載體的構(gòu)建[J];武漢大學學報(自然科學版);1997年06期

4 李建;曹娟;廖園園;劉潔;朱微;秦偉;秦紅剛;漆世華;謝紅玲;;偽狂犬病毒單克隆抗體的制備和鑒定[J];中國獸藥雜志;2014年03期

5 曹瑞兵;周國棟;周海霞;包晶晶;陳溥言;;豬β干擾素在畢赤酵母中的分泌表達及其對偽狂犬病毒的抑制作用[J];微生物學報;2006年03期

6 黃現(xiàn)青;魏戰(zhàn)勇;高曉平;韓慶功;崔艷紅;;表面活性素體外抗偽狂犬病毒活性研究[J];生物學雜志;2009年04期

7 田志軍;仇華吉;倪健強;周艷君;蔡雪輝;周國輝;王云峰;童光志;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學特性分析(英文)[J];遺傳學報;2005年12期

8 童武;張青占;鄭浩;劉飛;姜一峰;單同領(lǐng);周艷君;童光志;;免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病毒的分離和鑒定[J];中國動物傳染病學報;2013年03期

9 汪銘書，郭萬柱，婁高明，，費恩閣，宣華;偽狂犬病毒閩A株基因文庫的構(gòu)建及物理圖譜分析[J];中國病毒學;1994年04期

10 汪銘書,郭萬柱,婁高明,費恩閣,宣華;偽狂犬病毒閩A株基因文庫的構(gòu)建及物理圖譜的分析[J];西南農(nóng)業(yè)學報;1999年S2期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王金果;涂健;趙德明;;酸化條件對偽狂犬病毒清除效果的檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2010年學術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

2 王卓妍;朱家明;任芙蓉;;噻唑橙對血漿中偽狂犬病毒滅活效果的研究[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

3 郝鵬;阿蘭;;PK-15、ST細胞增殖偽狂犬弱毒效果的比較[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學、獸醫(yī)微生物學學術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

4 林春麗;王英;張寶琚;烏日娜;韓小梅;袁智慧;;不同的保存條件對偽狂犬病毒感染力的影響實驗[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2010年學術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

5 江云波;方六榮;肖少波;張輝;潘永飛;羅銳;李彬;陳煥春;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒兩種膜相關(guān)蛋白重組偽狂犬病毒的免疫反應(yīng)和免疫保護研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2006學術(shù)年會論文集（上冊）[C];2006年

6 魏振明;陳霖普;戴朝杰;李怡英;;偽狂犬病毒弱毒株若干生物學特性（摘要）[A];福建省畜牧獸醫(yī)學會第七次會員代表大會暨學術(shù)研討會論文集[C];1994年

7 嚴琳;牟帆;陳煥春;;重組豬白細胞介素2在小鼠模型中對偽狂犬病毒弱毒疫苗的佐劑效應(yīng)[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物微生態(tài)學分會第三屆第七次學術(shù)研討會論文集[C];2004年

8 何雁南;王蕩;徐卓菲;姚清俠;司有輝;錢平;陳煥春;;豬瘟、口蹄疫重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學特性[A];2006年度學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

9 田志軍;仇華吉;童光志;蔡雪輝;倪健強;周艷君;王云峰;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其鑒定[A];全國首屆動物生物技術(shù)學術(shù)研討會論文集[C];2004年

10 田志軍;仇華吉;倪健強;周艷君;蔡雪輝;孔令達;王云峰;童光志;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒構(gòu)建及其生物學特性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會成立20周年慶典暨第十次學術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉飛;偽狂犬病毒變異株感染細胞的microRNA表達譜及病毒抗原性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 宋云峰;豬2型圓環(huán)病毒核酸疫苗及重組偽狂犬病毒二價基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2006年

3 徐建祥;偽狂犬病毒IE180基因反義RNA轉(zhuǎn)基因動物研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2000年

4 宋巖;表達PRV-vp4基因的重組桿狀病毒和重組偽狂犬病毒的構(gòu)建[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2006年

5 田志軍;表達PRRSV GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其免疫效力的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2005年

6 黃偉堅;偽狂犬病毒上海株P(guān)K～-缺失株及PK～-gG～-雙缺失株的構(gòu)建及免疫原性初步研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2006年

7 郭洪;偽狂犬病毒IE180和EP0基因的表達調(diào)控[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2008年

8 謝立蘭;偽狂犬病毒和豬傳染性胃腸炎病毒誘導(dǎo)β干擾素產(chǎn)生的分子機制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2011年

9 聶浩;弓形蟲—偽狂犬病毒重組二價基因工程疫苗研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

10 肖少波;偽狂犬病毒gC基因“自殺性”DNA疫苗及VP22蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)的免疫增強效應(yīng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2004年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭佃磊;檢測抗偽狂犬病毒抗體膠體金免疫層析方法的建立及初步評價[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 李元果;圈養(yǎng)野生動物偽狂犬病病毒分離、鑒定與基因分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2015年

3 喬小改;基于microRNA表達譜的偽狂犬病毒及其基因缺失株與PK-15細胞互作的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

4 李碧;偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導(dǎo)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

5 劉莎莎;豬源IFITM3抗乙型腦炎病毒和偽狂犬病毒的效果和機制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

6 薄宗義;豬細小病毒—博卡病毒—偽狂犬病毒三價基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

7 陳功;偽狂犬病毒與宿主3D基因組層面互作研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2016年

8 袁振岳;偽狂犬病毒多肽抗體的制備及神經(jīng)元體外培養(yǎng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2016年

9 梁勛;利用CRISPR/Cas9和Cre/lox系統(tǒng)構(gòu)建偽狂犬病毒雙基因缺失活疫苗[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2016年

10 曹艷云;偽狂犬病毒變異株JS-2012和基因缺失株JS-2012-Δgl/gE感染小鼠的組織分布和致病性試驗[D];揚州大學;2016年

本文編號：539380