本文關(guān)鍵詞：豬δ冠狀病毒Nsp5的體外表達及其蛋白酶活性分析

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【摘要】：豬δ冠狀病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCo V)是一種新發(fā)現(xiàn)的腸道冠狀病毒,可引起仔豬的腹瀉。冠狀病毒編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp5是一種3C樣蛋白酶,在病毒多聚前體蛋白加工以及免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。本研究以PDCo V CHN-HN-2014株為模板,通過RT-PCR擴增Nsp5基因并將其克隆到原核表達載體p ET-28a(+)中,構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后SDS-PAGE檢測,結(jié)果表明Nsp5可在大腸桿菌中高效、可溶性表達。采用鎳親和層析對表達的Nsp5蛋白進行純化,并通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移方法檢測了其蛋白酶活性,結(jié)果表明純化的Nsp5蛋白能夠有效切割含有PDCo V Nsp5氨基端自切割位點的十二肽底物,證實體外表達的Nsp5重組蛋白具有良好的蛋白酶切割活性。豬δ冠狀病毒Nsp5蛋白的克隆、表達及其蛋白酶活性檢測,為深入研究該蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;華中師范大學(xué)第一附屬中學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 豬δ冠狀病毒 Nsp 蛋白酶活性
【基金】：國家科技支撐計劃(2015BAD12B02)
【分類號】：S852.651
【正文快照】： PROKARYOTIC EXPRESSION AND PROTEASE ACTIVITY OF PORCINEDELTACORONAVIRUS NSP5ZHANG Huan1,XIAO Wen-jie2,ZENG Zhe1,ZHU Xin-yu1,DONG Nan1,PENG Gui-qing1(1.College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China;2.No.1 Middle School

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本文編號：533380