發(fā)布時(shí)間：2017-07-05 19:06

  本文關(guān)鍵詞：NA蛋白對(duì)流感病毒受體結(jié)合特性的影響及鴨源H7N9流感病毒生物學(xué)特性的研究

  更多相關(guān)文章： NA蛋白 受體結(jié)合特異性 鴨源H7N9流感病毒 遺傳演化 抗原性 致病性

【摘要】：探索影響流感病毒受體結(jié)合特性的因素對(duì)于揭示流感病毒的致病性及傳播能力具有重要的意義。流感病毒結(jié)合SAα-2,3Gal(禽源受體)轉(zhuǎn)換為結(jié)合SAα-2,6Gal(人源受體)是禽流感病毒適應(yīng)人類宿主并引起流感大流行的關(guān)鍵因素。本研究選取了2株H7亞型流感病毒A/chicken/Jilin/SD020/2014(H7N2)(簡(jiǎn)稱JL/020)和A/Anhui/1/2013(H7N9)(簡(jiǎn)稱AH/1),其成熟HA僅57和312位(H3為基準(zhǔn))氨基酸有差異。同源建模發(fā)現(xiàn)HA上57和312位點(diǎn)與流感病毒受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域相距較遠(yuǎn),但是仍不能完全排除其對(duì)病毒受體結(jié)合特性的影響。利用反向遺傳操作技術(shù),我們構(gòu)建了一系列重組病毒和點(diǎn)突變病毒,并利用固相ELISA來檢測(cè)其受體結(jié)合特性。結(jié)果表明HA上的57和312位氨基酸不影響流感病毒的受體結(jié)合特異性,而NA影響了流感病毒受體結(jié)合特性。交叉血凝抑制試驗(yàn)(HI)結(jié)果表明,H7單因子血清、H7N9全病毒血清對(duì)拯救的JL/020和AH/1病毒株的抑制價(jià)沒有差異,而N2單因子血清對(duì)病毒的抑制能力有差異,表明NA影響了病毒受體結(jié)合特性。本研究表明,除HA以外,NA也能夠影響流感病毒的受體結(jié)合特性,這為進(jìn)一步研究流感病毒受體結(jié)合特性及應(yīng)對(duì)流感大流行提供了理論基礎(chǔ)。2014年流感病毒監(jiān)測(cè)中,我們從浙江、福建和廣西活禽市場(chǎng)鴨子體內(nèi)分離到了4株H7N9流感病毒。為了解4株鴨源H7N9流感病毒的生物學(xué)特性,我們對(duì)病毒的遺傳演化、抗原性、受體結(jié)合特性以及對(duì)BALB/c小鼠的致病性4個(gè)方面進(jìn)行了分析。遺傳進(jìn)化分析結(jié)果表明4株鴨源H7N9流感病毒8個(gè)基因片段與2013年新型H7N9流感病毒來源不同,并且親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。根據(jù)核苷酸相似性與系統(tǒng)發(fā)育樹,可以將4株鴨源H7N9流感病毒分為3個(gè)基因型,其中DK/ZJ/S4488/2014和DK/ZJ/S4489/2014屬于同一個(gè)基因型�？乖越Y(jié)果表明4株鴨源H7N9流感病毒與2013年新型H7N9流感病毒抗原差異較大。受體結(jié)合特性結(jié)果表明4株鴨源H7N9流感病毒可以同時(shí)結(jié)合SAα-2,3Gal受體和SAα-2,6Gal受體,并且結(jié)合SAα-2,3Gal受體的能力強(qiáng)于結(jié)合SAα-2,6Gal受體的能力。BALB/c小鼠致病性結(jié)果表明4株鴨源H7N9流感病毒可以高效地在小鼠鼻甲和肺部復(fù)制,而且病毒可以突破血腦屏障,在小鼠腦組織中復(fù)制,結(jié)果表明這4株鴨源H7N9流感病毒對(duì)BALB/c小鼠具有較強(qiáng)的致病能力。本研究表明鴨源H7N9流感病毒具有較強(qiáng)的致病性,對(duì)公眾造成的健康威脅不容忽視。
【關(guān)鍵詞】：NA蛋白 受體結(jié)合特異性 鴨源H7N9流感病毒 遺傳演化 抗原性 致病性
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-12
• 英文縮略表12-13
• 第一章 前言13-23
• 1.1 禽流感病毒綜述13-16
• 1.1.1 禽流感病毒的生物學(xué)特征13-14
• 1.1.2 影響流感病毒的受體結(jié)合特性的因素14-16
• 1.2 H7N9流感病毒概述16-17
• 1.3 流感病毒研究用動(dòng)物模型17-19
• 1.3.1 小鼠模型17-18
• 1.3.2 豚鼠模型18-19
• 1.3.3 雪貂模型19
• 1.4 流感病毒致病性的機(jī)制19-21
• 1.4.1 HA19-20
• 1.4.2 PB1-F220
• 1.4.3 聚合酶蛋白20
• 1.4.4 NS120-21
• 1.5 本研究的目的和意義21-23
• 第二章 NA蛋白對(duì)流感病毒受體結(jié)合特性影響的研究23-29
• 2.1 材料和方法23
• 2.1.1 病毒及主要實(shí)驗(yàn)材料23
• 2.1.2 試劑23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 2.2.1 HA序列比對(duì)及同源建模23
• 2.2.2 點(diǎn)突變及拯救重組病毒23-24
• 2.2.3 病毒純化24
• 2.2.4 病毒受體結(jié)合特性的檢測(cè)24
• 2.2.5 血凝抑制試驗(yàn)24
• 2.3 結(jié)果24-28
• 2.3.1 HA序列比對(duì)及同源建模結(jié)果24-25
• 2.3.2 拯救的病毒及測(cè)序結(jié)果25-26
• 2.3.3 病毒受體結(jié)合特性結(jié)果26-27
• 2.3.4 血凝抑制結(jié)果27-28
• 2.4 討論28-29
• 第三章 鴨源H7N9流感病毒的遺傳演化分析29-44
• 3.1 材料與方法29-30
• 3.1.1 病毒株29
• 3.1.2 試劑29
• 3.1.3 病毒的純化增殖29
• 3.1.4 病毒核酸提取及反轉(zhuǎn)錄29-30
• 3.1.5 PCR產(chǎn)物純化及上機(jī)測(cè)序30
• 3.1.6 序列拼接及分析30
• 3.1.7 生物安全30
• 3.2 結(jié)果30-42
• 3.2.1 鴨源H7N9流感HA進(jìn)化分析30-31
• 3.2.2 鴨源H7N9流感NA進(jìn)化分析31
• 3.2.3 鴨源H7N9流感PB2基因進(jìn)化分析31-32
• 3.2.4 鴨源H7N9流感PB1基因進(jìn)化分析32
• 3.2.5 鴨源H7N9流感PA基因進(jìn)化分析32-33
• 3.2.6 鴨源H7N9流感NP基因進(jìn)化分析33
• 3.2.7 鴨源H7N9流感M基因進(jìn)化分析33
• 3.2.8 鴨源H7N9流感NS基因進(jìn)化分析33-42
• 3.2.9 鴨源H7N9流感基因型劃分42
• 3.3 討論42-44
• 第四章 鴨源H7N9流感病毒的抗原性分析44-46
• 4.1 材料與方法44
• 4.1.1 病毒株44
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物44
• 4.1.3 血清44
• 4.1.4 血清的交叉血凝-血凝抑制實(shí)驗(yàn)44
• 4.2 結(jié)果44-45
• 4.2.1 交叉HA-HI試驗(yàn)結(jié)果44-45
• 4.3 討論45-46
• 第五章 鴨源H7N9流感病毒的受體結(jié)合特性分析46-49
• 5.1 材料46
• 5.1.1 病毒株46
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法46
• 5.2.1 病毒純化46
• 5.2.2 病毒受體結(jié)合特性分析46
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-48
• 5.4 討論48-49
• 第六章 鴨源H7N9流感病毒對(duì)BALB/C小鼠的致病性研究49-56
• 6.1 材料與方法49
• 6.1.1 病毒49
• 6.1.2 實(shí)驗(yàn)材料49
• 6.1.3 生物安全49
• 6.1.4 雞胚半數(shù)感染量（EID50）的測(cè)定49
• 6.1.5 病毒對(duì)BALB/c小鼠致病實(shí)驗(yàn)49
• 6.2 結(jié)果49-54
• 6.2.1 病毒雞胚半數(shù)感染量（EID50）49-50
• 6.2.2 病毒在小鼠體內(nèi)復(fù)制情況50-51
• 6.2.3 小鼠體重變化51-54
• 6.3 討論54-56
• 第七章 全文結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 致謝65-66
• 作者簡(jiǎn)介66

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本文編號(hào)：523203