本文關鍵詞：一起豬血凝性腦脊髓炎的診斷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：豬血凝性腦脊髓炎(Porcine hemagglutinating encephalomyelitis,PHE)是由豬血凝性腦脊髓炎病毒(Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)引起豬的一種高度接觸性的傳染病。PHEV主要侵染豬的中樞神經(jīng)系統(tǒng),其引發(fā)仔豬的死亡率達20%~100%,而成年豬則很少發(fā)病。根據(jù)該病的臨床表現(xiàn)、傳播途徑、流行特點及病理組織學變化等,可以將其分為兩大類型,一種是以嘔吐、衰竭為主要特征的嘔吐消耗型(Vomiting and wasting disease,VWD),另一種是以出現(xiàn)神經(jīng)癥狀為主的腦脊髓炎型。前者多呈急性暴發(fā),是最初被發(fā)現(xiàn)的PHE疾病類型。血清學調(diào)查發(fā)現(xiàn),該病在中國、加拿大、英國、北愛爾蘭、日本及美國等多個國家和地區(qū)均有發(fā)生和流行。1986年,我國首次報道PHEV感染的發(fā)生,之后多個省份均有該病的發(fā)生和流行。近年來,東北地區(qū)頻繁暴發(fā)該病,血清學調(diào)查發(fā)現(xiàn)吉林省和遼寧省豬群中存在較高PHEV陽性感染率。最近幾年,豬血凝性腦脊髓炎多次在規(guī)�；姆N豬場出現(xiàn),給當?shù)仞B(yǎng)豬業(yè)造成較大的經(jīng)濟損失。2015年8月初,吉林省長春市北四環(huán)玉泉養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的母豬陸續(xù)開始產(chǎn)仔,母豬未見流產(chǎn)或產(chǎn)弱胎、死胎現(xiàn)象。新生仔豬十分活潑,未見異常。但多數(shù)仔豬在10日齡左右開始發(fā)病(個別仔豬于2日齡發(fā)病),出現(xiàn)抽搐、后肢麻痹、不能站立等特點,部分表現(xiàn)嘔吐、腹瀉等臨床癥狀;有的斷奶仔豬也出現(xiàn)類似癥狀。截止到8月中旬,先后由10頭母豬生產(chǎn)的128頭仔豬全部死亡(死亡率100%)。為了進一步對疾病做出診斷,本研究分別從病理學和病原學角度進行了分析和研究。1病理學診斷對送檢病死豬進行大體病理剖檢,內(nèi)臟組織器官未見有明顯的病變,但可見腦組織淤血、水腫,胃腸內(nèi)充滿大量內(nèi)容物。采集病豬的脾臟、腎臟、腦、脊髓等多個組織,制作石蠟切片并進行H.E.染色,鏡檢可見,肝臟發(fā)生輕度的顆粒變性,肝小葉間門管區(qū)靜脈嚴重淤血;脾臟脾小體淋巴細胞結(jié)構(gòu)疏松,少量淋巴細胞胞核濃縮,動脈周圍淋巴鞘顯著增厚;脊髓灰質(zhì)膠質(zhì)細胞圍繞在神經(jīng)元周圍形成明顯的“衛(wèi)星現(xiàn)象”;腦組織可見有典型的噬神經(jīng)現(xiàn)象,呈現(xiàn)非化膿性腦炎的病理變化;部分腎小管上皮細胞變性、壞死。2病原學診斷利用針對PHEV的特異性引物對剖檢病豬的各組織器官進行RT-PCR擴增,擴增出與目的片段大小一致的特異性條帶。為了排除能引起相似臨床癥狀的病原感染的可能,本研究分別利用針對豬血凝性腦脊髓炎病毒(PHEV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、丁型冠狀病毒(PDCo V)、豬輪狀病毒(Po RV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)等病毒的特異性引物進行類癥鑒別診斷。結(jié)果顯示,僅有針對PHEV引物的RT-PCR擴增結(jié)果為陽性,其他病毒的擴增結(jié)果均為陰性。細菌學檢測結(jié)果也為陰性,排除了細菌混合感染的可能性。之后,對PHEV陽性病料組織進行研磨處理,研磨上清液經(jīng)感作處理后接種正常PK-15細胞,進行病毒的分離,接種細胞在盲傳6代后出現(xiàn)變圓、融合、聚堆等明顯的CPE。電鏡負染觀察可見,病毒粒子具有冠狀病毒典型的“帽子”結(jié)構(gòu)。隨后將分離的病毒接種到18-20日齡的Balb/c小鼠體內(nèi),并設置陰性和陽性對照,結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗組小鼠接毒后出現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀,一周后死亡,死亡小鼠的腦組織病理學觀察發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)“噬神經(jīng)”現(xiàn)象,死亡小鼠的腦和脾臟RT-PCR檢測結(jié)果均為陽性。綜合上述結(jié)果,從病原學角度證實該起病例為PHEV感染所致。之后,在分離獲得PHEV毒株的基礎上,對其M、N基因序列進行擴增、克隆及測序,并進行同源性分析和系統(tǒng)遺傳進化樹分析,遺傳進化分析結(jié)果顯示,該毒株與本實驗室在2014年分離獲得的吉林PHEV-JT06病毒株和加拿大在2002年所分離的PHEV-Canada病毒株的親緣關系最近。該研究不僅為針對PHEV的臨床快速診斷提供重要的技術手段,而且將為針對PHEV疫苗的研制提供重要的物質(zhì)基礎,并為進一步制定針對PHEV的切實有效的防控措施提供一定的理論依據(jù)。
【關鍵詞】：豬血凝性腦脊髓炎 診斷 分離鑒定 遺傳進化樹分析
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-13
• 前言13-15
• 第1章 文獻綜述15-29
• 1.1 病原學15-17
• 1.2 流行病學17-19
• 1.3 臨床癥狀19-20
• 1.4 病理變化20-21
• 1.5 致病機理21
• 1.6 診斷21-28
• 1.7 防制28-29
• 第2章 一起豬血凝性腦脊髓炎的診斷29-46
• 2.1 材料與方法29-37
• 2.2 結(jié)果37-43
• 2.3 討論43-45
• 2.4 小結(jié)45-46
• 第3章 豬血凝性腦脊髓炎病毒的病原分離鑒定及M、N基因的遺傳進化分析46-65
• 3.1 材料與方法46-53
• 3.2 結(jié)果53-62
• 3.3 討論62-64
• 3.4 小結(jié)64-65
• 結(jié)論65-66
• 參考文獻66-75
• 導師簡介75-76
• 個人簡介76-77
• 致謝77

【參考文獻】

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本文編號：508158