本文關鍵詞：泰安某豬場豬瘟病毒的檢測及疫苗免疫效果評價，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：豬瘟是由黃病毒科的豬瘟病毒感染引起的豬的一種熱性、高度接觸傳染性疾病,該病自19世紀爆發(fā)以來,一直影響著全球的養(yǎng)豬業(yè),每年給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。豬瘟兔化弱毒疫苗的使用,使得豬瘟在我國的流行范圍及造成的損失大大降低,但近年來在常規(guī)免疫豬瘟疫苗的豬場又有豬瘟病例的爆發(fā),發(fā)病豬群主要集中在保育階段,病豬多表現(xiàn)為熱性疾病的一般性癥狀,發(fā)病率高、死亡率也不低;母豬被感染后多表現(xiàn)為一過性繁殖障礙,當與其它病原微生物混合感染后,也能明顯影響豬場的生產(chǎn)成績。2014年11月泰安某豬場保育豬群發(fā)生以高熱(40~41℃)、精神沉郁、食欲不振、四肢內(nèi)側及耳尖發(fā)紺為主要特征的急性熱性傳染病,且常規(guī)性治療措施如退燒、肌注頭孢噻呋鈉及飲水給予電解多維和葡萄糖等對該病無明顯療效。為了明確引起此次疫情的致病病原,在流行病學調(diào)查的基礎上,開展了病理解剖、組織病理學檢查、分子生物學檢測、病毒分離與鑒定、病毒基因擴增測序及同源性比對等試驗。大體剖檢及組織病理學檢查結果表明病豬具有豬瘟病毒感染的特征性病變?nèi)鐫{液性-出血性淋巴結炎、脾臟梗死、病毒性腦炎、腸道淋巴組織壞死及固膜性腸炎等,初步顯示該病可能由豬瘟病毒感染引起,并排除細菌感染的可能。分子生物學及病毒分離結果表明,送檢的3份病料中僅有豬瘟病毒被檢出且被分離得到(SDTA2015)。隨后我們對豬瘟病毒E2基因全長進行了克隆和測序,E2基因全長為1119個堿基,編碼373個氨基酸;相似性分析表明,SDTA2015與其它參考毒株的核苷酸相似性介于81.3%~97.4%之間,氨基酸相似性介于87.7%~98.1%之間。分離株與8個各基因亞型的參考毒株相比,與3.4基因亞型的TWN株相比具有最低的核苷酸(81.8%)和氨基酸相似性(88.7%)。而與2.1基因亞型的參考毒株具有更高的核苷酸(90.4%~96.2%)和氨基酸相似性(93.8%~97.6%)。其中SDTA2015與2.1d亞型參考毒株(SDQS)的相似性最高,核苷酸為96.2%,氨基酸為97.6%。另外,新分離株與2.1b亞型的同源性高于2.1a或2.1c,表明2.1b亞型和2.1d亞型具有較高的相似度,這與之前的報道一致。隨后,我們將新分離株SDTA2015與27株參考序列構建了系統(tǒng)發(fā)育進化樹,結果表明,這28條序列被分到了3個基因群(1,2,3)中,共包括8個基因亞群(1.1~1.4,2.1~2.3,3.4)。其中,2.1亞群能被進一步劃分為2.1a,2.1b,2.1c及一個新被定義的2.1d基因亞群。此次分離得到的豬瘟毒株在進化樹中屬于2.1亞群,與傳統(tǒng)的石門毒株(1.1)或兔化弱毒疫苗毒株(HCLV,1.1)具有較大的不同。待該場發(fā)病豬只康復且疫情消除后,豬場恢復了正常的生產(chǎn)和免疫,遂對該場不同階段豬只進行采樣,以判定其免疫狀態(tài)并對免疫效果進行評價。自該場共采集血液樣本131份,陽性樣本有106份,整體陽性率為80.92%,整體豬瘟抗體水平不錯。不同階段豬群抗體陽性率在60.00%~86.67%之間,呈現(xiàn)出一定的差異性。其中以生產(chǎn)公豬的抗體陽性率最高,育肥豬的抗體陽性率最低,表明育肥后期豬瘟抗體水平下降,育肥豬對豬瘟病毒的易感性較高。此外,妊娠母豬及保育豬的豬瘟抗體陽性率均低于85.00%,說明抗體水平不是太好�？偟膩碚f,該場此次疫情確系豬瘟病毒感染引起,且致病病原屬于2.1亞型中的一個新的亞型2.1d,表明2.1d亞型的豬瘟病毒已在我省廣泛傳播和流行,并能造成豬只急性發(fā)病和死亡。關于新分離株的毒力和致病性特征尚不明確,需要進一步試驗研究。此外,抗體檢測結果表明,該場在疫情撲滅后,及時調(diào)整了豬瘟疫苗的免疫程序,新的免疫程序能夠使豬群獲得較高水平的抗體水平,但育肥豬的抗體水平較差,如若育肥后期有間歇性豬瘟病例出現(xiàn)的話,應該在育肥期加強免疫一次豬瘟疫苗。
【關鍵詞】：豬瘟 豬瘟病毒 綜合診斷 基因變異 抗體
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 符號說明4-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 前言12-27
• 1.1 豬瘟概述12-13
• 1.2 豬瘟病毒病原學及其流行特點13-14
• 1.3 豬瘟病毒在全球的流行現(xiàn)狀14-15
• 1.4 豬瘟病毒的分子特征15-20
• 1.4.1 豬瘟病毒的 5’-端非編碼區(qū)16
• 1.4.2 豬瘟病毒的 3’-端非編碼區(qū)16-17
• 1.4.3 Npro蛋白17
• 1.4.4 其他非結構蛋白17-18
• 1.4.5 結構蛋白18-19
• 1.4.5.1 核衣殼蛋白18
• 1.4.5.2 Erns糖蛋白18-19
• 1.4.5.3 E1糖蛋白19
• 1.4.6 囊膜糖蛋白E219-20
• 1.5 豬瘟病毒致病機制與特點20-23
• 1.5.1 致病機制20-21
• 1.5.2 免疫抑制21-22
• 1.5.2.1 豬瘟病毒感染引起免疫器官損傷21
• 1.5.2.2 豬瘟病毒感染引起淋巴細胞數(shù)量下降21-22
• 1.5.2.3 豬瘟病毒抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生22
• 1.5.2.4 豬瘟病毒感染導致樹突狀細胞無應答22
• 1.5.3 持續(xù)感染22-23
• 1.6 豬瘟的綜合診斷23-25
• 1.6.1 病理學診斷23
• 1.6.2 血清學診斷23-24
• 1.6.3 分子生物學診斷24-25
• 1.7 豬瘟的防控與凈化25-26
• 1.7.1 建立健全生物安全措施25
• 1.7.2 做好免疫及監(jiān)測25-26
• 1.7.3 凈化種豬群26
• 1.8 研究目的和意義26-27
• 2 材料與方法27-38
• 2.1 材料27-31
• 2.1.1 試驗動物27
• 2.1.2 樣品采集27-28
• 2.1.3 試劑與耗材28
• 2.1.4 主要儀器設備與器材28-29
• 2.1.5 常用溶液配制29-30
• 2.1.6 引物設計與合成30
• 2.1.7 細胞30
• 2.1.8 生物信息學分析軟件30-31
• 2.2 方法31-38
• 2.2.1 病死豬的組織病理學檢查31-33
• 2.2.1.1 玻片的處理31
• 2.2.1.2 組織切片的制備31-32
• 2.2.1.3 組織切片的蘇木素-伊紅（H&E）染色32-33
• 2.2.2 病料中病毒感染狀況檢測33-34
• 2.2.2.1 病料研磨與核酸提取33-34
• 2.2.2.2 病料樣品的PCR/RT-PCR檢測34
• 2.2.3 豬瘟病毒分離34-35
• 2.2.4 豬瘟病毒E2基因擴增，陽性擴增片段的膠回收、連接、轉化與測序35
• 2.2.5 豬瘟病毒E2基因序列及推導氨基酸序列分析35-36
• 2.2.6 血清中抗豬瘟病毒抗體水平的檢測36-38
• 3 結果38-45
• 3.1 病死豬的眼觀和組織學病變38-40
• 3.2 疑似病料的病原檢測結果40-41
• 3.3 病毒分離與鑒定41
• 3.4 E2基因核苷酸及氨基酸序列的相似性分析41-43
• 3.5 E2基因與各參考毒株差異性分析43-44
• 3.6 豬瘟抗體水平44-45
• 4 討論45-46
• 5 結論46-47
• 附錄47-48
• 參考文獻48-54
• 致謝54

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