本文關(guān)鍵詞：泰安某豬場(chǎng)豬瘟病毒的檢測(cè)及疫苗免疫效果評(píng)價(jià)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：豬瘟是由黃病毒科的豬瘟病毒感染引起的豬的一種熱性、高度接觸傳染性疾病,該病自19世紀(jì)爆發(fā)以來(lái),一直影響著全球的養(yǎng)豬業(yè),每年給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。豬瘟兔化弱毒疫苗的使用,使得豬瘟在我國(guó)的流行范圍及造成的損失大大降低,但近年來(lái)在常規(guī)免疫豬瘟疫苗的豬場(chǎng)又有豬瘟病例的爆發(fā),發(fā)病豬群主要集中在保育階段,病豬多表現(xiàn)為熱性疾病的一般性癥狀,發(fā)病率高、死亡率也不低;母豬被感染后多表現(xiàn)為一過(guò)性繁殖障礙,當(dāng)與其它病原微生物混合感染后,也能明顯影響豬場(chǎng)的生產(chǎn)成績(jī)。2014年11月泰安某豬場(chǎng)保育豬群發(fā)生以高熱(40~41℃)、精神沉郁、食欲不振、四肢內(nèi)側(cè)及耳尖發(fā)紺為主要特征的急性熱性傳染病,且常規(guī)性治療措施如退燒、肌注頭孢噻呋鈉及飲水給予電解多維和葡萄糖等對(duì)該病無(wú)明顯療效。為了明確引起此次疫情的致病病原,在流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上,開(kāi)展了病理解剖、組織病理學(xué)檢查、分子生物學(xué)檢測(cè)、病毒分離與鑒定、病毒基因擴(kuò)增測(cè)序及同源性比對(duì)等試驗(yàn)。大體剖檢及組織病理學(xué)檢查結(jié)果表明病豬具有豬瘟病毒感染的特征性病變?nèi)鐫{液性-出血性淋巴結(jié)炎、脾臟梗死、病毒性腦炎、腸道淋巴組織壞死及固膜性腸炎等,初步顯示該病可能由豬瘟病毒感染引起,并排除細(xì)菌感染的可能。分子生物學(xué)及病毒分離結(jié)果表明,送檢的3份病料中僅有豬瘟病毒被檢出且被分離得到(SDTA2015)。隨后我們對(duì)豬瘟病毒E2基因全長(zhǎng)進(jìn)行了克隆和測(cè)序,E2基因全長(zhǎng)為1119個(gè)堿基,編碼373個(gè)氨基酸;相似性分析表明,SDTA2015與其它參考毒株的核苷酸相似性介于81.3%~97.4%之間,氨基酸相似性介于87.7%~98.1%之間。分離株與8個(gè)各基因亞型的參考毒株相比,與3.4基因亞型的TWN株相比具有最低的核苷酸(81.8%)和氨基酸相似性(88.7%)。而與2.1基因亞型的參考毒株具有更高的核苷酸(90.4%~96.2%)和氨基酸相似性(93.8%~97.6%)。其中SDTA2015與2.1d亞型參考毒株(SDQS)的相似性最高,核苷酸為96.2%,氨基酸為97.6%。另外,新分離株與2.1b亞型的同源性高于2.1a或2.1c,表明2.1b亞型和2.1d亞型具有較高的相似度,這與之前的報(bào)道一致。隨后,我們將新分離株SDTA2015與27株參考序列構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù),結(jié)果表明,這28條序列被分到了3個(gè)基因群(1,2,3)中,共包括8個(gè)基因亞群(1.1~1.4,2.1~2.3,3.4)。其中,2.1亞群能被進(jìn)一步劃分為2.1a,2.1b,2.1c及一個(gè)新被定義的2.1d基因亞群。此次分離得到的豬瘟毒株在進(jìn)化樹(shù)中屬于2.1亞群,與傳統(tǒng)的石門(mén)毒株(1.1)或兔化弱毒疫苗毒株(HCLV,1.1)具有較大的不同。待該場(chǎng)發(fā)病豬只康復(fù)且疫情消除后,豬場(chǎng)恢復(fù)了正常的生產(chǎn)和免疫,遂對(duì)該場(chǎng)不同階段豬只進(jìn)行采樣,以判定其免疫狀態(tài)并對(duì)免疫效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。自該場(chǎng)共采集血液樣本131份,陽(yáng)性樣本有106份,整體陽(yáng)性率為80.92%,整體豬瘟抗體水平不錯(cuò)。不同階段豬群抗體陽(yáng)性率在60.00%~86.67%之間,呈現(xiàn)出一定的差異性。其中以生產(chǎn)公豬的抗體陽(yáng)性率最高,育肥豬的抗體陽(yáng)性率最低,表明育肥后期豬瘟抗體水平下降,育肥豬對(duì)豬瘟病毒的易感性較高。此外,妊娠母豬及保育豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率均低于85.00%,說(shuō)明抗體水平不是太好�？偟膩�(lái)說(shuō),該場(chǎng)此次疫情確系豬瘟病毒感染引起,且致病病原屬于2.1亞型中的一個(gè)新的亞型2.1d,表明2.1d亞型的豬瘟病毒已在我省廣泛傳播和流行,并能造成豬只急性發(fā)病和死亡。關(guān)于新分離株的毒力和致病性特征尚不明確,需要進(jìn)一步試驗(yàn)研究。此外,抗體檢測(cè)結(jié)果表明,該場(chǎng)在疫情撲滅后,及時(shí)調(diào)整了豬瘟疫苗的免疫程序,新的免疫程序能夠使豬群獲得較高水平的抗體水平,但育肥豬的抗體水平較差,如若育肥后期有間歇性豬瘟病例出現(xiàn)的話(huà),應(yīng)該在育肥期加強(qiáng)免疫一次豬瘟疫苗。
【關(guān)鍵詞】：豬瘟 豬瘟病毒 綜合診斷 基因變異 抗體
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S858.28
【目錄】：

• 符號(hào)說(shuō)明4-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 前言12-27
• 1.1 豬瘟概述12-13
• 1.2 豬瘟病毒病原學(xué)及其流行特點(diǎn)13-14
• 1.3 豬瘟病毒在全球的流行現(xiàn)狀14-15
• 1.4 豬瘟病毒的分子特征15-20
• 1.4.1 豬瘟病毒的 5’-端非編碼區(qū)16
• 1.4.2 豬瘟病毒的 3’-端非編碼區(qū)16-17
• 1.4.3 Npro蛋白17
• 1.4.4 其他非結(jié)構(gòu)蛋白17-18
• 1.4.5 結(jié)構(gòu)蛋白18-19
• 1.4.5.1 核衣殼蛋白18
• 1.4.5.2 Erns糖蛋白18-19
• 1.4.5.3 E1糖蛋白19
• 1.4.6 囊膜糖蛋白E219-20
• 1.5 豬瘟病毒致病機(jī)制與特點(diǎn)20-23
• 1.5.1 致病機(jī)制20-21
• 1.5.2 免疫抑制21-22
• 1.5.2.1 豬瘟病毒感染引起免疫器官損傷21
• 1.5.2.2 豬瘟病毒感染引起淋巴細(xì)胞數(shù)量下降21-22
• 1.5.2.3 豬瘟病毒抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生22
• 1.5.2.4 豬瘟病毒感染導(dǎo)致樹(shù)突狀細(xì)胞無(wú)應(yīng)答22
• 1.5.3 持續(xù)感染22-23
• 1.6 豬瘟的綜合診斷23-25
• 1.6.1 病理學(xué)診斷23
• 1.6.2 血清學(xué)診斷23-24
• 1.6.3 分子生物學(xué)診斷24-25
• 1.7 豬瘟的防控與凈化25-26
• 1.7.1 建立健全生物安全措施25
• 1.7.2 做好免疫及監(jiān)測(cè)25-26
• 1.7.3 凈化種豬群26
• 1.8 研究目的和意義26-27
• 2 材料與方法27-38
• 2.1 材料27-31
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物27
• 2.1.2 樣品采集27-28
• 2.1.3 試劑與耗材28
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備與器材28-29
• 2.1.5 常用溶液配制29-30
• 2.1.6 引物設(shè)計(jì)與合成30
• 2.1.7 細(xì)胞30
• 2.1.8 生物信息學(xué)分析軟件30-31
• 2.2 方法31-38
• 2.2.1 病死豬的組織病理學(xué)檢查31-33
• 2.2.1.1 玻片的處理31
• 2.2.1.2 組織切片的制備31-32
• 2.2.1.3 組織切片的蘇木素-伊紅（H&E）染色32-33
• 2.2.2 病料中病毒感染狀況檢測(cè)33-34
• 2.2.2.1 病料研磨與核酸提取33-34
• 2.2.2.2 病料樣品的PCR/RT-PCR檢測(cè)34
• 2.2.3 豬瘟病毒分離34-35
• 2.2.4 豬瘟病毒E2基因擴(kuò)增，陽(yáng)性擴(kuò)增片段的膠回收、連接、轉(zhuǎn)化與測(cè)序35
• 2.2.5 豬瘟病毒E2基因序列及推導(dǎo)氨基酸序列分析35-36
• 2.2.6 血清中抗豬瘟病毒抗體水平的檢測(cè)36-38
• 3 結(jié)果38-45
• 3.1 病死豬的眼觀(guān)和組織學(xué)病變38-40
• 3.2 疑似病料的病原檢測(cè)結(jié)果40-41
• 3.3 病毒分離與鑒定41
• 3.4 E2基因核苷酸及氨基酸序列的相似性分析41-43
• 3.5 E2基因與各參考毒株差異性分析43-44
• 3.6 豬瘟抗體水平44-45
• 4 討論45-46
• 5 結(jié)論46-47
• 附錄47-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 致謝54

【相似文獻(xiàn)】

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