本文關(guān)鍵詞：雞TAP基因變異及其與馬立克氏病的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體(Transporter associated with antigen processing,TAP)屬于ATP結(jié)合盒式蛋白(ATP-binding cassette transporter,ABC)超家族。TAP在MHC-I類分子的成熟及膜表面表達(dá)中起著十分重要的作用,MHC-I分子在病毒感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)中和通過與抗原肽結(jié)合并將其遞呈到細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)來轉(zhuǎn)化細(xì)胞中發(fā)揮重要作用。當(dāng)TAP功能障礙或表達(dá)下降時(shí)都將導(dǎo)致腫瘤抗原不能被有效地轉(zhuǎn)運(yùn),從而導(dǎo)致腫瘤逃避免疫監(jiān)視。TAP基因的功能在人類和哺乳動(dòng)物疾病中研究較多,與禽類疾病的相關(guān)性研究較少。馬立克氏病(MD)是由皰疹病毒2或MD病毒(MDV)引起的雞的一種毀滅性的腫瘤性病毒病,對(duì)世界各地的家禽業(yè)均造成過重大經(jīng)濟(jì)損失,而且MDV的毒力在不斷地增加,通過疫苗途徑不能有效地預(yù)防和控制,需要通過基因手段來檢測(cè)、有針對(duì)性地治療和預(yù)防。本研究的目的是檢測(cè)濟(jì)寧百日雞、壽光雞、SPF雞中TAP基因的變異及其與馬立克氏病的相關(guān)性。本研究首先運(yùn)用分子遺傳標(biāo)記技術(shù),檢測(cè)了濟(jì)寧百日雞、壽光雞、SPF雞的TAP基因的多態(tài)性,統(tǒng)計(jì)分析了不同基因型與MD的相關(guān)性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)TAP1-3、TAP1-4、TAP2-2和TAP2-3引物擴(kuò)增產(chǎn)物有多態(tài)基因型。進(jìn)一步對(duì)三個(gè)品種的雞群進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室攻毒試驗(yàn),統(tǒng)計(jì)分析了TAP特異性片段上的變異位點(diǎn),繼而分別在濟(jì)寧百日雞、壽光雞、SPF雞的TAP1特異性片段上依次發(fā)現(xiàn)了18個(gè)、14個(gè)、16個(gè)變異位點(diǎn),在濟(jì)寧百日雞、壽光雞、SPF雞的TAP2特異性片段上分別發(fā)現(xiàn)了12個(gè)、14個(gè)、13個(gè)變異位點(diǎn)。對(duì)變異位點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,發(fā)現(xiàn)TAP1有4個(gè)變異位點(diǎn)可以導(dǎo)致氨基酸的改變,TAP2上有7個(gè)變異位點(diǎn)可以導(dǎo)致氨基酸的改變。對(duì)TAP的變異位點(diǎn)與馬立克氏病的相關(guān)性進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)有24個(gè)變異位點(diǎn)與馬立克氏病有關(guān),其中JB1323、JB1050、JB1148、SG1303、SPF1082、SPF1196位點(diǎn)與馬立克氏病的易感性有顯著相關(guān)(P0.05)。進(jìn)一步對(duì)6個(gè)變異位點(diǎn)的不同基因型進(jìn)行遺傳模式分析,發(fā)現(xiàn)JB1323和JB1050是馬立克氏病的易感高風(fēng)險(xiǎn)突變位點(diǎn),JB1323位點(diǎn)的(C→T)可引起氨基酸的改變,由丙氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)槔i氨酸;JB1050位點(diǎn)(G→T)使得丙氨酸變?yōu)榻z氨酸。為了進(jìn)一步了解TAP表達(dá)量與MD的相關(guān)性,采用熒光定量PCR技術(shù)研究了TAP基因的變異位點(diǎn)JB1323和JB1050的不同基因型所在的個(gè)體中TAP的表達(dá)量,結(jié)果發(fā)現(xiàn),TAP的表達(dá)量在JB1323位點(diǎn)處易感的純合體中比野生純合體的低,在JB1050位點(diǎn)處雜合體中比純合體的低,但差異不顯著(P0.05)。感染馬立克氏病病毒后TAP1的表達(dá)量在心臟、肝臟均顯著升高,TAP1在脾臟中表達(dá)量顯著下降,在腎臟、肺臟中TAP1表達(dá)量變化不顯著。對(duì)TAP2表達(dá)量的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在脾臟中,TAP2在抗病組中相對(duì)表達(dá)量顯著下降。進(jìn)一步對(duì)雞脾臟中TAP表達(dá)量進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)感染馬立克氏病病毒后TAP在脾臟中表達(dá)量有先增加、后下降的變化規(guī)律,說明TAP表達(dá)量升高可以作為馬立克氏病感染初期的一個(gè)標(biāo)志性指標(biāo),用于檢測(cè)馬立克氏病。
【關(guān)鍵詞】：MD TAP1 TAP2 雞 變異位點(diǎn) 攻毒實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31
【目錄】：

• 英文縮略詞4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-23
• 1.1 MHC的研究進(jìn)展11-13
• 1.1.1 MHC的結(jié)構(gòu)與功能11-12
• 1.1.2 MHC與疾病相關(guān)性的研究進(jìn)展12-13
• 1.2 抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體的研究進(jìn)展13-17
• 1.2.1 TAP基因結(jié)構(gòu)13-15
• 1.2.2 TAP的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制15
• 1.2.3 TAP基因的多態(tài)性研究進(jìn)展15-17
• 1.2.4 TAP表達(dá)量與疾病相關(guān)性的研究進(jìn)展17
• 1.3 馬立克氏病的研究進(jìn)展17-20
• 1.3.1 MDV的研究進(jìn)展18-19
• 1.3.2 馬立克氏病的病理學(xué)研究進(jìn)展19-20
• 1.4 山東地方雞種質(zhì)資源20-21
• 1.4.1 濟(jì)寧百日雞種質(zhì)特性研究現(xiàn)狀20
• 1.4.2 壽光雞種質(zhì)特性研究現(xiàn)狀20-21
• 1.5 分子遺傳標(biāo)記技術(shù)21-22
• 1.5.1 單鏈構(gòu)象多態(tài)性技術(shù)（SSCP）21
• 1.5.2 單核苷酸多態(tài)性（SNP）21-22
• 1.6 本研究的目的與意義22-23
• 2 材料與方法23-38
• 2.1 試驗(yàn)材料23-26
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和毒株23
• 2.1.2 試驗(yàn)試劑與來源23-24
• 2.1.3 主要儀器與來源24
• 2.1.4 數(shù)據(jù)庫(kù)和軟件24
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)所用試劑的配置24-26
• 2.2 試驗(yàn)方法26-38
• 2.2.1 三種雞的TAP基因多態(tài)性分析26-31
• 2.2.2 TAP1和TAP2特異性片段與MD的相關(guān)性分析31-35
• 2.2.3 雞TAP表達(dá)量與馬立克氏病的相關(guān)性分析35-38
• 3 結(jié)果與分析38-72
• 3.1 三種雞的TAP基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果38-40
• 3.1.1 三種雞的DNA提取和質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果38
• 3.1.2 三種雞的TAP1和TAP2基因的PCR結(jié)果38-39
• 3.1.3 三種雞TAP1和TAP2多態(tài)性分析39-40
• 3.2 三種雞TAP1和TAP2的特異性片段與馬立克氏病的相關(guān)分析40-66
• 3.2.1 三種雞TAP1和TAP2的特異性片段的PCR擴(kuò)增40-41
• 3.2.2 三種雞TAP1和TAP2特異性片段的變異位點(diǎn)克隆測(cè)序結(jié)果41-43
• 3.2.3 三種雞的TAP基因的多態(tài)位點(diǎn)的遺傳分析43-52
• 3.2.4 變異位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的氨基酸比對(duì)結(jié)果52
• 3.2.5 導(dǎo)致氨基酸變化的變異位點(diǎn)導(dǎo)致的蛋白質(zhì)變化分析52-54
• 3.2.6 所有變異位點(diǎn)的等位基因頻率的χ2 檢驗(yàn)54-61
• 3.2.7 變異位點(diǎn)與馬立克氏病抗性的相關(guān)性分析61-66
• 3.3 TAP的表達(dá)量分析66-72
• 3.3.1 濟(jì)寧百日雞的總RNA提取結(jié)果66
• 3.3.2 持家基因與目的基因的PCR結(jié)果檢測(cè)66-67
• 3.3.3 TAP1、TAP2和β-actin的擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和熔解曲線67-69
• 3.3.4 TAP在濟(jì)寧百日雞內(nèi)臟組織里的相對(duì)表達(dá)量69-71
• 3.3.5 TAP在1323位點(diǎn)、1050 位點(diǎn)不同基因型中的表達(dá)量71-72
• 4 討論72-77
• 4.1 三種雞TAP1和TAP2基因的多態(tài)性72-74
• 4.2 TAP多態(tài)性與馬立克氏病的相關(guān)性74-75
• 4.3 TAP表達(dá)量與馬立克氏病的相關(guān)性75-77
• 5 結(jié)論77-78
• 參考文獻(xiàn)78-89
• 致謝89

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本文編號(hào)：488385