本文關(guān)鍵詞：天府肉羊SCD1基因在肌肉中的表達(dá)與棕櫚油酸和油酸含量的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：硬脂酰輔酶A脫氫酶(SCD, stearoyl-CoA desaturase)屬于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)合蛋白,是飽和脂肪酸向單不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化的限速酶。無論是從頭合成還是從日糧中獲取的飽和脂肪酸,SCD均可以催化其在9號和10號碳原子之間脫氫形成一個雙鍵。SCD主要催化軟脂酸和硬脂酸形成棕櫚油酸和油酸,而且SCD在調(diào)節(jié)細(xì)胞膜流動性和脂類代謝過程中也有著重要作用,這一作用是通過調(diào)節(jié)飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸的比例完成的,提高這個比例會引發(fā)一系列疾病,例如：肥胖、高血壓、糖尿病、免疫紊亂、心血管疾病和癌癥等。單不飽和脂肪酸在諸多疾病中的積極作用,使其在“健康肉”的生產(chǎn)中具有重要意義。此外,SCD1基因的單核苷酸多態(tài)性對肉質(zhì)中的pH、大理石紋等級、失水率、熟肉率、肌內(nèi)脂肪含量和肌肉顏色等性狀有顯著影響。本試驗(yàn)采用RT-PCR、分子克隆、RT-qPCR、Western blotting以及氣象色譜法等實(shí)驗(yàn)技術(shù)對SCD1基因和肌肉脂肪酸進(jìn)行了初步研究,結(jié)果如下：1.獲得天府肉羊SCD1基因的編碼區(qū)全序列,序列長1080bp(GeneBank:KT315581),編碼359個氨基酸。SCD1蛋白是疏水蛋白,含有12個磷酸化位點(diǎn)、4個跨膜結(jié)構(gòu)域和一個可能的N-糖基化位點(diǎn),不含信號肽序列。核酸和氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn),SCD1基因與哺乳動物具有高度的相似性,其中和綿羊的相似性最高。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明,天府肉羊SCD1基因與綿羊和牛的SCD1基因同源性最高,與黃顙魚SCD1基因同源性最低。2.采用RT-qPCR方法分析SCDl基因在90、180和270日齡天府肉羊的8個肌肉組織中的表達(dá)情況,結(jié)果表明,在檢測的肌肉組織中均有SCD1表達(dá),并且日齡、肌肉及日齡與肌肉的交互作用對SCD1基因的mRNA相對表達(dá)水平均有極顯著影響。相同日齡不同肌肉的天府肉羊SCD1基因相對表達(dá)量的多重比較結(jié)果表明：3個年齡段的三角肌的SCD1基因相對表達(dá)量均極顯著高于其他7個肌肉組織(P0.01);90日齡臂三頭肌的SCD1基因相對表達(dá)量極顯著高于腓腸肌和半膜肌(P0.01);180日齡腓腸肌、臂三頭肌和股二頭肌的SCDl基因相對表達(dá)量極顯著高于股四頭肌(P0.01);270日齡股二頭肌的SCD1基因相對表達(dá)量極顯著高于除三角肌以外的其他6個肌肉組織(P0.01),并且臂三頭肌、半膜肌和背最長肌的SCD1基因相對表達(dá)量極顯著高于臀中肌、腓腸肌和股四頭肌(P0.01)。相同肌肉在不同日齡的天府肉羊SCD1基因相對表達(dá)量的多重比較表明：天府肉羊8個肌肉組織的SCD1基因相對表達(dá)量均表現(xiàn)出與日齡密切相關(guān)的趨勢,SCD1基因相對表達(dá)量先升高后降低,在180日齡達(dá)到最大值(P0.01),三角肌、股二頭肌、股四頭肌、腓腸肌(P0.01)和背最長肌、半膜肌(P0.05)在3月齡的SCD1基因相對表達(dá)量最低。3. 采用Western blotting方法分析SCD1蛋白在90、180和270日齡天府肉羊的8個肌肉組織中的表達(dá)情況,結(jié)果表明,在所有檢測的肌肉組織中均有SCD1表達(dá),3個年齡段的半膜肌SCD1蛋白表達(dá)量均極顯著低于同日齡其他7個肌肉組織(P0.01),90日齡背最長肌和三角肌的SCD1蛋白表達(dá)量極顯著高于其他6個肌肉組織(P0.01),180日齡三角肌的SCD1蛋白表達(dá)量極顯著高于其他7個肌肉組織(P0.01),270日齡臀中肌的SCD1蛋白表達(dá)量極顯著高于其他7個肌肉組織(P0.01)。4. 采用氣相色譜法分析測定90、180和270日齡天府肉羊的8個肌肉組織中棕櫚油酸和油酸的含量,結(jié)果表明,日齡對棕櫚油酸和油酸含量有極顯著影響(P0.01),而肌肉以及肌肉和日齡的互作效應(yīng)對這兩種脂肪酸的含量影響不顯著。棕櫚油酸在180日齡的背最長肌和臂三頭肌中的含量顯著高于臀中肌(P0.05),油酸在270日齡的半膜肌中的含量顯著高于股四頭肌。除此之外,兩種脂肪酸在三個年齡段中不同肌肉間的含量沒有顯著性差異。隨著日齡的增長,棕櫚油酸在各肌肉組織中的含量逐漸降低,而油酸的含量逐漸升高。臀中肌、三頭肌、股四頭肌和腓腸肌在90日齡的棕櫚油酸含量極顯著高于270日齡(P0.01),背最長肌、角肌、股二頭肌和半膜肌在90日齡的棕櫚油酸含量顯著高于270日齡(P0.05)。背最長肌、三角肌、股二頭肌和半膜肌在270日齡的油酸含量顯著高于90日齡(P0.05),其他4個肌肉組織在270日齡的油酸含量與90日齡無顯著性差異。5. 對SCD1基因、蛋白表達(dá)水平與肌肉組織中棕櫚油酸和油酸的相關(guān)性分析表明,SCD1基因在肌肉組織中的表達(dá)量與棕櫚油酸和油酸含量沒有顯著的相關(guān)性。SCD1蛋白表達(dá)量與棕櫚油酸含量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為-0.644(P0.01);SCD1蛋白表達(dá)量與油酸含量呈正相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.675(P0.01)。
【關(guān)鍵詞】：SCD1 天府肉羊 組織表達(dá) 棕櫚油酸 油酸 相關(guān)分析
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 常用詞語縮寫10-14
• 1 文獻(xiàn)綜述14-23
• 1.1 單不飽和脂肪酸14-16
• 1.2 SCD基因的研究進(jìn)展16-22
• 1.2.1 SCD基因的發(fā)現(xiàn)16
• 1.2.2 SCD基因的分類16
• 1.2.3 SCD基因的結(jié)構(gòu)16-17
• 1.2.4 SCD1基因的功能17-21
• 1.2.5 SCD1基因的表達(dá)與調(diào)控21-22
• 1.2.6 SCD1基因與肉質(zhì)22
• 1.3 本研究的目的與意義22-23
• 2 材料與方法23-36
• 2.1 試驗(yàn)材料23-26
• 2.1.1 試驗(yàn)動物與樣品采集23
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備23-24
• 2.1.3 主要試劑及試劑盒24-25
• 2.1.4 主要試劑的配制25-26
• 2.2 試驗(yàn)方法26-36
• 2.2.1 總RNA的提取26-27
• 2.2.2 總RNA質(zhì)量和濃度檢測27
• 2.2.3 cDNA的合成27-28
• 2.2.4 引物設(shè)計(jì)28
• 2.2.5 SCD1基因cDNA克隆測序28-30
• 2.2.6 熒光定量PCR30-32
• 2.2.7 蛋白質(zhì)免疫雜交(Western Bloting)32-35
• 2.2.8 肌肉脂肪酸含量的測定35-36
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)分析36
• 3 結(jié)果與分析36-49
• 3.1 總RNA檢測36-37
• 3.2 SCD1基因克隆與序列分析37-42
• 3.2.1 SCD1基因RT-PCR結(jié)果37-38
• 3.2.2 SCD1基因克隆產(chǎn)物測序38-39
• 3.2.3 SCD1基因序列比對39-40
• 3.2.4 SCD1基因進(jìn)化樹的構(gòu)建40
• 3.2.5 SCD1蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析40-42
• 3.3 SCD1基因熒光定量PCR結(jié)果42-45
• 3.3.1 引物正確性驗(yàn)證42
• 3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和熔解曲線42-43
• 3.3.3 SCD1基因mRNA相對表達(dá)結(jié)果43-45
• 3.4 SCD1蛋白表達(dá)結(jié)果45-46
• 3.5 天府肉羊肌肉棕櫚油酸和油酸含量46-48
• 3.6 SCD1基因相對表達(dá)量與棕櫚油酸、油酸的相關(guān)分析48
• 3.7 SCD1蛋白表達(dá)量與棕櫚油酸、油酸的相關(guān)分析48-49
• 4 討論49-52
• 4.1 SCD1基因生物信息學(xué)分析49-50
• 4.1.1 SCD1基因cDNA序列分析49
• 4.1.2 SCD1蛋白序列分析49-50
• 4.2 SCD1基因的MRNA表達(dá)分析50-51
• 4.3 SCD1蛋白表達(dá)分析51
• 4.4 棕櫚油酸和油酸含量分析51
• 4.5 SCD1基因、蛋白表達(dá)與棕櫚油酸、油酸含量的相關(guān)性分析51-52
• 4.5.1 SCD1基因表達(dá)量與棕櫚油酸、油酸含量的相關(guān)性分析51-52
• 4.5.2 SCD1蛋白表達(dá)量與棕櫚油酸、油酸含量的相關(guān)性分析52
• 5 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 致謝57-58
• 附錄58-61
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文61

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 佘珠花;氣相色譜法中油脂脂肪酸衍生化方法及其選擇[J];糧食加工;2004年06期

2 閆少芳,肖穎,王軍波,梁學(xué)軍,劉毅;富含單不飽和脂肪酸的堅(jiān)果對高脂大鼠血脂水平的影響[J];衛(wèi)生研究;2003年02期

  本文關(guān)鍵詞：天府肉羊SCD1基因在肌肉中的表達(dá)與棕櫚油酸和油酸含量的相關(guān)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：486255