為了建立一種檢測A型塞內(nèi)卡病毒(SVA)VP2蛋白抗體的阻斷ELISA方法,試驗用SVA VP2蛋白作為抗原包被酶標(biāo)板,采用棋盤法確定最佳蛋白包被濃度和單克隆抗體最佳稀釋倍數(shù)。同時對阻斷ELISA的其他條件(封閉液、血清稀釋度、底物反應(yīng)條件)進(jìn)行優(yōu)化,對方法的特異性和重復(fù)性進(jìn)行考察。結(jié)果表明:VP2蛋白最佳包被濃度為0.5μg/mL;最佳封閉液為2%BSA,每孔200μL,37℃封閉1 h;待檢血清最佳稀釋度為1∶1,在37℃條件下作用1 h;單克隆抗體最佳稀釋度為1∶40 000,在37℃條件下作用1 h;底物最佳反應(yīng)條件為室溫避光10 min。特異性試驗結(jié)果顯示,SVA陽性血清與豬偽狂犬病病毒、豬繁殖與呼吸綜征病毒、豬瘟病毒、豬口蹄疫病毒、豬流行性腹瀉病毒陽性血清均無交叉反應(yīng)。批間、批內(nèi)重復(fù)性試驗結(jié)果的變異系數(shù)均小于10%。對200份豬血清樣本進(jìn)行熒光抗體中和試驗和阻斷ELISA方法檢測,符合率為96.0%。說明該ELISA方法具有良好的特異性和重復(fù)性,可用于塞內(nèi)卡病毒血清抗體檢測和流行病學(xué)調(diào)查。

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蛋白質(zhì)、細(xì)胞及血清
    1.2 主要試劑
    1.3 阻斷ELISA檢測方法的建立
    1.4 阻斷ELISA檢測方法的優(yōu)化
        1.4.1 阻斷ELISA抗原包被濃度和酶標(biāo)抗體最佳稀釋倍數(shù)的確定
        1.4.2 血清最佳稀釋度
        1.4.3 封閉液的選擇
        1.4.4 最佳顯色時間的選擇
        1.4.5 陰性、陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)的確定
    1.5 阻斷ELISA特異性試驗
    1.6 阻斷ELISA重復(fù)性試驗
    1.7 臨床血清樣品的檢測
2 結(jié)果與分析
    2.1 阻斷ELISA最佳反應(yīng)條件的確定
    2.2 阻斷ELISA臨界值的確定
    2.3 阻斷ELISA特異性試驗
    2.4 阻斷ELISA重復(fù)性試驗
    2.5 臨床血清樣品的檢測
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