豬鏈球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一種重要的人畜共患病病原,能引起豬腦膜炎、敗血癥、關(guān)節(jié)炎等多種病癥。在33個(gè)血清型中,豬鏈球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)流行最廣、毒力最強(qiáng)。近年來(lái),SS2引起的豬鏈球菌病在我國(guó)有兩次暴發(fā)流行,造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,帶來(lái)嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題。盡管已報(bào)道了多種該菌的毒力因子,其致病機(jī)理仍不清晰。本研究以SS2新型溶血相關(guān)基因Hhly3為研究對(duì)象,通過(guò)構(gòu)建基因缺失突變株,比較生物學(xué)特性,研究Hhly3在SS2致病過(guò)程中的作用。研究結(jié)果豐富了對(duì)該菌致病機(jī)理的認(rèn)識(shí)。 1、豬鏈球菌2型新型溶血相關(guān)基因分布及蛋白定位 我國(guó)近兩次流行的SS2菌株有89K PAI這一重要毒力標(biāo)志。Hhly3基因是通過(guò)差減抑制雜交篩選到的位于89K PAI上的SS2可能毒力基因。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)基因序列分析,克隆表達(dá),基因分布檢測(cè),蛋白定位檢測(cè)等方法鑒定Hhly3基因。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：Hhly3基因編碼78kDa蛋白,含有8段跨膜結(jié)構(gòu),與溶血素Ⅲ型超家族有共同的保守區(qū)域。待檢31株S.suis菌株中,Hhly3主要存在于SS2中國(guó)...

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞表
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬鏈球菌2型致病機(jī)理及細(xì)菌溶血素研究進(jìn)展
        1 豬鏈球菌病
        2 豬鏈球菌2型主要致病機(jī)理
            2.1 對(duì)上皮組織的定植、粘附及侵襲
            2.2 在血液中的存活及擴(kuò)散
            2.3 炎癥反應(yīng)及感染性休克
            2.4 CNS侵襲及腦膜炎
        3 細(xì)菌溶血素
            3.1 溶血素的分類
            3.2 豬鏈球菌溶血素
            3.3 其他重要溶血素
    參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)研究
    第二章 豬鏈球菌2型新型溶血相關(guān)基因分布及蛋白定位
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 菌株和質(zhì)粒
            1.2 試劑與儀器
            1.3 序列分析
            1.4 基因分布檢測(cè)
            1.5 HHLY3克隆及表達(dá)
            1.6 SS2 HHLY3蛋白定位檢測(cè)
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 序列分析
            2.2 基因分布檢測(cè)
            2.3 重組表達(dá)質(zhì)粒鑒定
            2.4 SDS-PAGE及Western blotting分析
            2.5 兔rHHLY3多克隆抗體制備
            2.6 SS2的HHLY3蛋白定位
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstract
    第三章 豬鏈球菌2型Hhly3基因缺失株的構(gòu)建及生物學(xué)特性分析
        摘要
        1. 材料與方法
            1.1 菌株、質(zhì)粒及試劑
            1.2 缺失載體構(gòu)建
            1.3 基因缺失株的構(gòu)建
            1.4 基因互補(bǔ)株的構(gòu)建
            1.5 基因突變株遺傳穩(wěn)定性鑒定
            1.6 基因突變株形態(tài)學(xué)及生長(zhǎng)特性比較
            1.7 溶血特性比較
            1.8 全血存活實(shí)驗(yàn)
            1.9 酸度實(shí)驗(yàn)
            1.10 生物被膜形成能力比較
            1.11 粘附實(shí)驗(yàn)
            1.12 毒力相關(guān)基因的表達(dá)分析
            1.13 斑馬魚毒力實(shí)驗(yàn)
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 基因缺失質(zhì)粒及互補(bǔ)質(zhì)粒的鑒定
            2.2 互補(bǔ)質(zhì)粒的鑒定
            2.3 基因缺失株篩選及鑒定
            2.4 互補(bǔ)株的鑒定
            2.5 缺失株和互補(bǔ)株形態(tài)學(xué)及生長(zhǎng)特性分析
            2.6 缺失株和互補(bǔ)株溶血特性比較
            2.7 全血存活試驗(yàn)
            2.8 酸堿耐受程度檢測(cè)
            2.9 生物被膜形成能力比較
            2.10 細(xì)胞粘附試驗(yàn)
            2.11 毒力相關(guān)基因的表達(dá)分析
            2.12 斑馬魚毒力實(shí)驗(yàn)
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstract
    第四章 Hhly3-ref雙基因缺失株的構(gòu)建及特性分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 菌株、質(zhì)粒及試劑
            1.2 基因缺失載體構(gòu)建
            1.3 雙基因缺失株的構(gòu)建及鑒定
            1.4 雙基因缺失株生物學(xué)特性分析
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 基因缺失質(zhì)粒的鑒定
            2.2 雙基因缺失株篩選及鑒定
            2.3 雙基因缺失株生物學(xué)特性分析
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstract
全文總結(jié)
致謝



本文編號(hào)：4024179