輸血傳播病毒(Transfusion transmitted virus, TTV)是一種小的,無囊膜的,單股環(huán)狀負鏈的人畜共患DNA病毒,TTV的發(fā)現(xiàn)是于1997年底由NiShizawa運用代表性差異分析技術(Representational difference analysis)從一名非甲一庚型肝炎病人的血清中克隆得到的病毒DNA片段,隨后,人們在非靈長類以及豬、牛、羊、犬,貓、家禽等多種家養(yǎng)及野生動物體內也發(fā)現(xiàn)了TTV的感染。豬源TTV (TTSuVs)在世界范圍內廣泛檢出,引起人們的極大關注。目前TTSuVs的診斷主要依賴DNA的檢測,由于豬源TTV具有潛在的危害,因此對其抗原性進行分析是非常必要的。本實驗利用基因重組技術將TTSuV2ORF2基因克隆至原核表達系統(tǒng)中,制備獲得了具有生物學活性的重組Cap蛋白,并進行了免疫原性研究,主要研究內容如下： 1、為了解廣東省豬群中豬輸血傳播病毒(TTSuVs)的感染情況,本研究采用Nest-PCR方法對廣東省7個不同地區(qū)規(guī)�；i場抽檢采集的159份育肥豬血清進行檢測。結果表明,TTSuVs的兩個種TTSuV1和TTSuV26(?)...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻綜述
    第一章 豬輸血傳播病毒的研究進展
        1 病原學
            1.1 TTV的理化特性
            1.2 TTV的分類
            1.3 TTV的結構功能
        2 TTSuV_s的傳播方式與傳播途徑
        3 TTSuV_s的流行病學調查
        4 TTV的致病性
        5 TTV的檢測方法
            5.1 套式PCR
            5.2 多重PCR
            5.3 熒光定量PCR
            5.4 滾環(huán)復制
            5.5 血清學診斷方法
    參考文獻
第二篇 試驗研究
    第一章 廣東TTSuV_s流行病學調查及其主要抗原編碼區(qū)進化分析
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 樣品采集
            1.2 菌株,質粒與試劑
            1.3 血清樣品DNA的提取
            1.4 TTSuV₁與TTSuV₂的PCR診斷
            1.5 結果鑒定與數(shù)據(jù)統(tǒng)計
            1.6 TTSuV_sORF1的擴增與同源性分析
        2 結果
            2.1 樣品的PCR檢測結果
            2.2 TTSuV_s檢測結果統(tǒng)計分析
            2.3 TTSuV_sORF1的同源性分析
        3 討論
        參考文獻
        ABSTRACT
    第二章 廣東一株TTSuV₂ORF1的生物信息學特性分析及其蛋白表達
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 樣品
            1.2 試劑與儀器
            1.3 TTSuV₂ ORF1的序列分析
            1.4 TTSuV₂ ORF2基因的擴增、純化及回收
            1.5 原核表達載體pET21b-ORF1-VP1與pET21b-ORF1-VP2的構建和鑒定
            1.6 重組質粒的誘導表達和純化
            1.7 包涵體膜蛋白的洗滌
            1.8 重組表達蛋白的回收與純化
            1.9 Western-blotting檢測重組蛋白
        2 結果
            2.1 序列分析
            2.2 目的片段的獲得
            2.3 重組表達質粒的構建和鑒定
            2.4 重組蛋白的誘導表達和可溶性分析
            2.5 重組表達蛋白的回收與純化
            2.6 Western-blotting檢測重組蛋白的表達
        3. 討論
        參考文獻
        ABSTRACT
    第三章 間接ELISA檢測方法對TTSuV₂ ORF1抗原表位的篩選與分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 血清樣本中病毒DNA的和抗TTSuV₂抗體的檢測
            1.4 商品化ELISA試劑盒檢測血清樣本中其它病毒的陽性率
        2. 結果與分析
            2.1 抗原與血清
            2.2 血清樣本中病毒DNA的和抗TTSuV₂抗體的檢測
            2.3 商品化ELISA試劑盒檢測血清樣本中其它病毒的陽性率
        3 討論
        參考文獻
        ABSTRACT
全文總結
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文



本文編號：4023636