精原干細(xì)胞（SSCs）是唯一能將遺傳物質(zhì)傳遞給后代的雄性生殖干細(xì)胞,目前已被應(yīng)用于雄性生殖系統(tǒng)疾病治療和基因編輯動物生產(chǎn)等領(lǐng)域。但是,由于SSCs數(shù)量稀少,僅占睪丸細(xì)胞的0.02%⁰.03%,嚴(yán)重制約了其應(yīng)用。因此,需要在體外進(jìn)行SSCs培養(yǎng)促進(jìn)其增殖,以獲取足夠數(shù)量的細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)研究。目前,關(guān)于SSCs體外培養(yǎng)的研究多集中在嚙齒類動物及靈長類動物上。早在2005年,小鼠SSCs便可在體外長期培養(yǎng)并被定向誘導(dǎo)分化為精子,且移植到生殖缺陷小鼠睪丸內(nèi)后可繁衍出后代。相較于嚙齒類動物,山羊等大型家畜SSCs體外培養(yǎng)技術(shù)起步晚,技術(shù)尚不成熟,需要進(jìn)一步研究完善。枸杞多糖（Lyciujm BarbarumPolysaccharides,LBP）是從枸杞中提取出來的一種生物活性物質(zhì),具有抗氧化應(yīng)激、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能、提高生殖功能等作用,常應(yīng)用于動物細(xì)胞體外培養(yǎng)中。然而,目前LBP的對山羊SSCs的體外培養(yǎng)及冷凍保存的作用效果尚不明確。為了研究LBP對山羊SSCs體外增殖及冷凍保存效果的影響,本研究首先將LBP進(jìn)行液相色譜分析以研究其復(fù)雜的成分組成,然后采用30～45日齡的山...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號對照表
第一章 精原干細(xì)胞的研究進(jìn)展
    1.1 精原干細(xì)胞的來源與精子發(fā)生
        1.1.1 精原干細(xì)胞的來源
        1.1.2 精子發(fā)生
    1.2 精原干細(xì)胞的分離與純化
        1.2.1 精原干細(xì)胞的分離
        1.2.2 精原干細(xì)胞的純化
    1.3 影響精原干細(xì)胞體外增殖的因素
        1.3.1 血清與培養(yǎng)基
        1.3.2 生長因子
        1.3.3 飼養(yǎng)層
        1.3.4 其他因素
    1.4 生殖細(xì)胞冷凍保存
第二章 枸杞多糖生物活性的研究進(jìn)展
    2.1 抑制細(xì)胞凋亡
    2.2 抑制癌細(xì)胞生長
    2.3 修復(fù)細(xì)胞損傷
    2.4 改善細(xì)胞免疫功能
    2.5 促進(jìn)細(xì)胞增殖
    2.6 本研究的目的和意義
        2.6.1 研究的目的
        2.6.2 研究的意義
第三章 山羊精原干細(xì)胞的分離純化與鑒定
    引言
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 試驗方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 枸杞多糖紅外光譜分析及液相色譜分析
        3.2.2 山羊精原干細(xì)胞提取與純化
        3.2.3 山羊精原干細(xì)胞的鑒定
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 枸杞多糖對山羊精原干細(xì)胞增殖及凋亡的影響
    引言
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 試驗方法
        4.1.3 數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 不同濃度LBP對 SSCs增殖的影響
        4.2.2 細(xì)胞內(nèi)MDA、SOD、T-AOC含量
        4.2.3 細(xì)胞內(nèi)凋亡和抗凋亡基因的表達(dá)
        4.2.4 細(xì)胞內(nèi)凋亡和抗凋亡蛋白的表達(dá)
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 枸杞多糖對山羊精原干細(xì)胞冷凍保存的作用
    引言
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗材料
        5.1.2 試驗方法
        5.1.3 數(shù)據(jù)分析
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 解凍后SSCs活率
        5.2.2 細(xì)胞內(nèi)MDA、SOD、T-AOC含量
        5.2.3 解凍后凋亡及抗凋亡基因表達(dá)情況
    5.3 討論
    5.4 小結(jié)
結(jié)論與創(chuàng)新點
    結(jié)論
    創(chuàng)新點
    下一步研究計劃
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄 A 主要溶液配制
    附錄 B 山羊SSCs細(xì)胞中總RNA的提取
    附錄 C cDNA第一鏈的合成
    附錄 D 實時熒光定量PCR(Real-time PCR)
致謝
個人簡歷



本文編號：4019991