豬支原體肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine,MPS)是一種慢性呼吸道傳染病,也稱為豬氣喘病或豬地方性肺炎(swine enzootic pneumonia,EP)。豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是引起MPS的主要病原體。豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是造成豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原體。臨床上Mhp常會(huì)與PCV2等病原體協(xié)同感染,增加相關(guān)疾病的嚴(yán)重性和潛在的持久性,最終導(dǎo)致死亡率上升。目前,防控Mhp和PCV2的主要手段是疫苗免疫。但傳統(tǒng)的商業(yè)疫苗以滅活疫苗和弱毒疫苗為主,其普遍存在免疫原性不好、免疫反應(yīng)持續(xù)時(shí)間不穩(wěn)定或者毒力容易回復(fù)等缺點(diǎn)。而多聯(lián)疫苗可實(shí)現(xiàn)接種一針預(yù)防多種疾病的目的,尤其在疫病長(zhǎng)期共存的情況下,聯(lián)苗將成為未來防疫的主要類型。通過基因工程方法制備的疫苗能同時(shí)表達(dá)多種疾病的抗原蛋白,達(dá)到聯(lián)合疫苗的使用效果,同時(shí)也解決了常規(guī)聯(lián)苗抗原組分相容性的問題...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．３基因與載體的雙酶切??Ｆｉｇ?３．３?Ｄｏｕｂｌｅ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｅｎｅｓ?ａｎｄ?ｖｅｃｔｏｒｓ??

通過相應(yīng)引物對(duì)叩９７ｒ八ｒ／＾２和ｃａｐ基因進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增后，與ｐＥＴ?３２ａ載體一??同使用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切，對(duì)酶切產(chǎn)物片段通過瓊脂糖凝膠電泳分離，電泳??結(jié)果如圖３．３所示。樣品從左往右依次為ＤＬ?２０００?Ｍａｒｋｅｒ，／＊／＾／＆〇尺１＋＆／１?（３００?ｂｐ....

圖３．４重組質(zhì)粒ＰＣＲ鑒定??Ｆｉｇ?３．４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??

鑒定正確的四種重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌ＢＬ２１?（ＤＥ３）中，進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，菌體分??離與破碎，并進(jìn)一步用鎳柱進(jìn)行純化。對(duì)純化洗脫液進(jìn)行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳，以及考馬斯亮??藍(lán)染色鑒定（如圖３．５）。樣品從左往右依次為蛋白Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔｈｅｒｍｏ?２６６１６）、ｒＰ９７Ｒｌ、....

圖３．５純化后蛋白的ＳＤＳ＾ＰＡＧＥ鑒定??Ｆｉｇ?３．５?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｂｙ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ??

２５０?匕談氣’孩、滿驚士汾！??圖３．４重組質(zhì)粒ＰＣＲ鑒定??Ｆｉｇ?３．４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??４．３重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化??鑒定正確的四種重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌ＢＬ２１?（ＤＥ３）中，進(jìn)行誘導(dǎo)表....

圖４．４?Ｐ９７Ｒ１Ｐ４６Ｐ４２嵌合蛋白三維結(jié)構(gòu)模擬圖??

４結(jié)果分析??４．１雙焚光重組桿狀病毒載體的鑒定??對(duì)Ｐ９７Ｒ１Ｐ４６Ｐ４２嵌合蛋白三維結(jié)構(gòu)的模擬如圖４．４所示，青色區(qū)域?yàn)椋校梗罚遥钡鞍祝??色區(qū)域?yàn)椋校矗兜鞍�，橙色區(qū)域?yàn)椋校矗驳鞍�，綠色區(qū)域?yàn)椋校梗罚遥焙停校矗�、Ｐ４６和Ｐ４２之間的??兩個(gè)柔性接頭蛋白。??圖４．４?Ｐ９７....

本文編號(hào)：3993973