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豬肺炎支原體和豬圓環(huán)病毒2型二聯(lián)基因工程疫苗的研制

發(fā)布時(shí)間:2024-06-14 01:57
  豬支原體肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine,MPS)是一種慢性呼吸道傳染病,也稱為豬氣喘病或豬地方性肺炎(swine enzootic pneumonia,EP)。豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是引起MPS的主要病原體。豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是造成豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原體。臨床上Mhp常會(huì)與PCV2等病原體協(xié)同感染,增加相關(guān)疾病的嚴(yán)重性和潛在的持久性,最終導(dǎo)致死亡率上升。目前,防控Mhp和PCV2的主要手段是疫苗免疫。但傳統(tǒng)的商業(yè)疫苗以滅活疫苗和弱毒疫苗為主,其普遍存在免疫原性不好、免疫反應(yīng)持續(xù)時(shí)間不穩(wěn)定或者毒力容易回復(fù)等缺點(diǎn)。而多聯(lián)疫苗可實(shí)現(xiàn)接種一針預(yù)防多種疾病的目的,尤其在疫病長(zhǎng)期共存的情況下,聯(lián)苗將成為未來防疫的主要類型。通過基因工程方法制備的疫苗能同時(shí)表達(dá)多種疾病的抗原蛋白,達(dá)到聯(lián)合疫苗的使用效果,同時(shí)也解決了常規(guī)聯(lián)苗抗原組分相容性的問題...

【文章頁(yè)數(shù)】:84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

圖3.3基因與載體的雙酶切??Fig?3.3?Double?enzyme?digestion?of?genes?and?vectors??

圖3.3基因與載體的雙酶切??Fig?3.3?Double?enzyme?digestion?of?genes?and?vectors??

通過相應(yīng)引物對(duì)叩97r八r/^2和cap基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,與pET?32a載體一??同使用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切,對(duì)酶切產(chǎn)物片段通過瓊脂糖凝膠電泳分離,電泳??結(jié)果如圖3.3所示。樣品從左往右依次為DL?2000?Marker,/*/^/&〇尺1+&/1?(300?bp....


圖3.4重組質(zhì)粒PCR鑒定??Fig?3.4?Identification?of?recombinant?plasmids?by?PCR??

圖3.4重組質(zhì)粒PCR鑒定??Fig?3.4?Identification?of?recombinant?plasmids?by?PCR??

鑒定正確的四種重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21?(DE3)中,進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),菌體分??離與破碎,并進(jìn)一步用鎳柱進(jìn)行純化。對(duì)純化洗脫液進(jìn)行SDS-PAGE電泳,以及考馬斯亮??藍(lán)染色鑒定(如圖3.5)。樣品從左往右依次為蛋白Marker?(Thermo?26616)、rP97Rl、....


圖3.5純化后蛋白的SDS^PAGE鑒定??Fig?3.5?Identification?of?purified?recombinant?proteins?by?SDS-PAGE??

圖3.5純化后蛋白的SDS^PAGE鑒定??Fig?3.5?Identification?of?purified?recombinant?proteins?by?SDS-PAGE??

250?匕談氣’孩、滿驚士汾!??圖3.4重組質(zhì)粒PCR鑒定??Fig?3.4?Identification?of?recombinant?plasmids?by?PCR??4.3重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化??鑒定正確的四種重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21?(DE3)中,進(jìn)行誘導(dǎo)表....


圖4.4?P97R1P46P42嵌合蛋白三維結(jié)構(gòu)模擬圖??

圖4.4?P97R1P46P42嵌合蛋白三維結(jié)構(gòu)模擬圖??

4結(jié)果分析??4.1雙焚光重組桿狀病毒載體的鑒定??對(duì)P97R1P46P42嵌合蛋白三維結(jié)構(gòu)的模擬如圖4.4所示,青色區(qū)域?yàn)椋校梗罚遥钡鞍祝??色區(qū)域?yàn)椋校矗兜鞍,橙色區(qū)域?yàn)椋校矗驳鞍,綠色區(qū)域?yàn)椋校梗罚遥焙停校矗、P46和P42之間的??兩個(gè)柔性接頭蛋白。??圖4.4?P97....



本文編號(hào):3993973

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