試驗(yàn)旨在了解陸川豬丙酮酸脫氫激酶4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)基因CDS區(qū)序列信息及其所編碼蛋白的結(jié)構(gòu)和功能,構(gòu)建PDK4基因的真核表達(dá)載體,分析PDK4基因在陸川豬不同組織中的表達(dá)情況,以期為闡明PDK4基因在陸川豬生長發(fā)育過程中的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增陸川豬皮下脂肪PDK4基因CDS區(qū),利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測分析其結(jié)構(gòu)與功能,并利用常規(guī)分子克隆技術(shù)將其插入真核表達(dá)載體中獲得pEGFP-N1-PDK4,用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染3T3-L1細(xì)胞并觀察熒光,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測PDK4基因mRNA在陸川豬心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、背最長肌、皮下脂肪中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,陸川豬PDK4基因CDS區(qū)全長1 224 bp,編碼407個(gè)氨基酸,與NCBI上公布的野豬PDK4基因CDS區(qū)同源性達(dá)99.8%。對陸川豬PDK4基因所編碼的蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),其分子質(zhì)量約為46.144 ku,原子總數(shù)為6 509個(gè),理論等電點(diǎn)(pI)為7.21,帶正電荷和負(fù)電荷的氨基酸數(shù)均為42個(gè)。PDK4蛋白可能有2個(gè)N-糖基化位點(diǎn)...

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圖3PDK4基因系統(tǒng)進(jìn)化樹

圖2PDK4基因同源性比對2.2生物信息學(xué)分析

圖4陸川豬PDK4蛋白疏水性分析

利用TMHMMServerv2.0軟件對PDK4蛋白進(jìn)行跨膜結(jié)構(gòu)分析,結(jié)果顯示,該蛋白不存在跨膜結(jié)構(gòu)(圖5);利用Signal5.1軟件對該蛋白進(jìn)行信號肽預(yù)測,結(jié)果顯示無信號肽,說明PDK4蛋白為非分泌蛋白(圖6)。圖5陸川豬PDK4蛋白跨膜結(jié)構(gòu)分析

圖5陸川豬PDK4蛋白跨膜結(jié)構(gòu)分析

圖4陸川豬PDK4蛋白疏水性分析圖6陸川豬PDK4蛋白信號肽預(yù)測

圖6陸川豬PDK4蛋白信號肽預(yù)測

圖5陸川豬PDK4蛋白跨膜結(jié)構(gòu)分析2.2.4磷酸化位點(diǎn)和N-糖基化位點(diǎn)

本文編號：3983401