干擾素刺激基因(STING)和TANK結(jié)合激酶1(TBK1)是介導(dǎo)宿主Ⅰ型干擾素抗病毒應(yīng)答的關(guān)鍵因子。為深入研究STING和TBK1在山羊天然免疫應(yīng)答中的作用,采用RT-qPCR方法進(jìn)行了STING和TBK1組織特異性表達(dá)檢測(cè),并進(jìn)行了其組織分布的研究。由于物種差異較大,缺乏山羊STING的商品化抗體,本試驗(yàn)首先利用原核表達(dá)的STING蛋白制備了多克隆抗體。結(jié)果顯示,利用原核表達(dá)的STING重組蛋白免疫新西蘭大白兔后,經(jīng)ELISA和Western-blot證明獲得了特異性好的多克隆抗體。組織特異性表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示,STING在腸系膜淋巴結(jié)、心臟和脾的相對(duì)表達(dá)水平較高,而TBK1在大腦、肝、心臟和腎的相對(duì)表達(dá)水平較高。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示,在心肌細(xì)胞、肝細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、細(xì)支氣管上皮細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞和大腦皮層神經(jīng)元中均呈STING和TBK1陽(yáng)性。研究結(jié)果為進(jìn)一步探索STING和TBK1在山羊天然免疫應(yīng)答中的作用提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

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圖1pET-30a(＋)－STING的誘導(dǎo)和純化蛋白SDS-PAGE及Western-blot分析

中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)第50卷2.2海南黑山羊STING和TBK1基因的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，海南黑山羊STING、TBK1和β-actin基因的熔解曲線峰平滑、單一、擴(kuò)增特異性好。STING和TBK1基因在所有檢測(cè)組織中均有表達(dá)，其中STING基因在腸系膜淋巴結(jié)....

圖2海南黑山羊STING（A）和TBK1（B）在各組織中相對(duì)表達(dá)Figure2TherelativeexpressionlevelsofSTING(A)andTBK10STI1234567

中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)第50卷2.2海南黑山羊STING和TBK1基因的實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，海南黑山羊STING、TBK1和β-actin基因的熔解曲線峰平滑、單一、擴(kuò)增特異性好。STING和TBK1基因在所有檢測(cè)組織中均有表達(dá)，其中STING基因在腸系膜淋巴結(jié)....

圖3海南黑山羊STING和TBK1蛋白組織特異性的分布

第8期張彭濤等：山羊STING和TBK1基因組織特異性表達(dá)和分布的研究胞中的陽(yáng)性定位與STING蛋白相似，兩者之間陽(yáng)性表達(dá)程度不同（圖3H、I、J、K、L、M和N）。3討論STING和TBK1是細(xì)胞抗病毒反應(yīng)的核心因子，在Ⅰ型IFN誘導(dǎo)中起關(guān)鍵作用。關(guān)于STING和TBK1的研究....

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