為獲得穩(wěn)定表達豬源血管緊張素轉換酶2(ACE2)的細胞株,用以增殖豬流行性腹瀉病毒(PEDV)。構建了穩(wěn)定表達豬源ACE2的豬小腸上皮細胞系(IPEC-J2),并對PEDV在該細胞上的增殖進行了分析。將重組表達質粒pCMV3-porcine-ACE2-GFP轉染至IPEC-J2細胞后,經潮霉素B篩選和單克隆細胞培養(yǎng),獲得IPEC-J2-ACE2細胞系。通過熒光定量RT-PCR和Western blot對單克隆細胞中ACE2基因的mRNA轉錄和蛋白表達水平進行鑒定。以PEDV-WH株感染IPEC-J2-ACE2細胞,通過間接免疫熒光試驗和熒光定量RT-PCR檢測發(fā)現,PEDV-WH株在IPEC-J2-ACE2細胞中比在IPEC-J2細胞中的增殖能力高。

【文章頁數】：6 頁

【部分圖文】：

圖2重組質粒pCMV3-porcine-ACE2-GFP的雙酶切鑒定

分別對pCMV3-porcine-ACE2-GFP質粒進行KpnⅠ和BamHⅠ雙酶切鑒定豬源ACE2基因，BamHⅠ和XbaⅠ雙酶切鑒定GFP基因，PCR電泳結果顯示，插入的目的片段與預期大小一致（豬源ACE2基因2416bp,GFP基因714bp），送上海生工生物工程技術服務....

圖3IPEC-J2-ACE2細胞的篩選

分別提取IPEC-J2-ACE2細胞和IPEC-J2細胞的總RNA，然后進行相對熒光定量RT-PCR檢測。結果顯示，與IPEC-J2細胞組相比，IPEC-J2-ACE2細胞組豬源ACE2基因的mRNA水平明顯升高（圖4）。將IPEC-J2-ACE2細胞和IPEC-J2細胞的蛋白樣....

圖4IPEC-J2-ACE2細胞中ACE2的mRNA表達

圖3IPEC-J2-ACE2細胞的篩選圖5IPEC-J2-ACE2細胞中ACE2的蛋白表達

圖5IPEC-J2-ACE2細胞中ACE2的蛋白表達

圖4IPEC-J2-ACE2細胞中ACE2的mRNA表達2.5PEDV-WH毒株在IPEC-J2-ACE2細胞中的增殖

本文編號：3979430