本試驗從富含油脂的土壤中篩選到一株產(chǎn)脂肪酶的芽孢桿菌菌株3EA1-1，經(jīng)紫外誘變其酶活力達(dá)到50.5U/mL，命名為EA-300-A。對該菌株進(jìn)行16S rDNA序列分析，并結(jié)合生理生化和菌落形態(tài)特征，最后鑒定為枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）。 對上述菌株進(jìn)行體外模擬人工胃腸道的耐受性研究。研究發(fā)現(xiàn)：EA-300-A菌株對人工胃液、腸液和膽酸鹽培養(yǎng)基的耐受性比較強(qiáng)，同時通過安全性實驗，已經(jīng)基本證明它對動物沒有毒害作用。 上述研究表明，菌株Bacillus subtilis EA-300-A具有較高的酶活性，可以耐受人工胃腸液，并且生物安全，表明該菌株具有進(jìn)一步大規(guī)模應(yīng)用的潛力。為了便于后期菌劑生產(chǎn)，本試驗對菌株進(jìn)行了產(chǎn)芽孢條件優(yōu)化，單因素試驗和正交試驗結(jié)果表明，EA-300-A菌株最適的產(chǎn)芽孢發(fā)酵條件為：2.0%玉米粉，1.0%黃豆餅粉，0.3%CaCl2·2H2O，Na2HPO4·12H2O0.4%，NaH2PO4·2H2O0.2%，初始pH8.0，種齡12h，接種量10%，裝量50mL/250mL。 為了驗證EA-300-A菌劑在飼喂上的效果，選取蛋公雞為研究對象...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 脂肪酶在飼料中的應(yīng)用
        1.1.1 飼料中添加脂肪酶的作用
        1.1.2 飼料中添加脂肪酶的研究
    1.2 市售脂肪酶的不足
    1.3 微生物脂肪酶的種類及選育方法
        1.3.1 產(chǎn)脂肪酶微生物的種類
        1.3.2 產(chǎn)脂肪酶微生物菌株的篩選方法
        1.3.3 直接飼喂產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌的優(yōu)點
    1.4 本試驗的目的、意義及主要內(nèi)容
        1.4.1 本試驗的目的意義
        1.4.2 本試驗的主要內(nèi)容
第二章 產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌的分離篩選及鑒定
    2.1 試驗材料
        2.1.1 樣品
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 試劑
        2.1.4 儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 菌株的初篩
        2.2.2 產(chǎn)酶菌株的復(fù)篩
        2.2.3 酶活力的測定
        2.2.4 產(chǎn)酶菌株的鑒定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 產(chǎn)脂肪酶菌株的初篩
        2.3.2 產(chǎn)脂肪酶菌株的復(fù)篩
        2.3.3 酶活測定結(jié)果
        2.3.4 形態(tài)學(xué)測定
        2.3.5 分子生物學(xué)測定
        2.3.6 生理生化鑒定
    2.4 討論
第三章 產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌的紫外誘變
    3.1 試驗材料
        3.1.1 供試菌株
        3.1.2 培養(yǎng)基
        3.1.3 主要儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 生長曲線的測定
            3.2.1.1 種子液的制備
            3.2.1.2 標(biāo)記編號
            3.2.1.3 轉(zhuǎn)接培養(yǎng)
            3.2.1.4 生長曲線的制作
        3.2.2 菌株 3EA1-1 的紫外誘變
            3.2.2.1 紫外誘變處理
            3.2.2.2 初篩
            3.2.2.3 復(fù)篩
            3.2.2.4 酶活力的測定
        3.2.3 遺傳穩(wěn)定性測定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 3EA1-1 的對數(shù)生長曲線
        3.3.2 紫外誘變初篩結(jié)果
        3.3.3 紫外誘變復(fù)篩結(jié)果
        3.3.4 菌株 3EA1-1（300-A）遺傳穩(wěn)定性結(jié)果
    3.4 討論
第四章 誘變菌株 EA-300-A 體外特性評價
    4.1 試驗材料
        4.1.1 菌種
        4.1.2 培養(yǎng)基及試劑
        4.1.3 儀器
    4.2 試驗方法
        4.2.1 EA-300-A 菌株對人工胃液的耐受性
        4.2.2 EA-300-A 菌株對人工腸液的耐受性
        4.2.3 EA-300-A 菌株對膽酸鹽的耐受性
        4.2.4 安全性實驗
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 EA-300-A 菌株對人工胃液的耐受性
        4.3.2 EA-300-A 菌株對人工腸液的耐受性
        4.3.3 EA-300-A 菌株對膽酸鹽的耐受性
        4.3.4 安全性實驗
    4.4 討論
第五章 菌株 EA-300-A 產(chǎn)芽孢條件優(yōu)化
    5.1 試驗材料
        5.1.1 供試菌株
        5.1.2 培養(yǎng)基
        5.1.3 試劑
        5.1.4 試驗儀器
    5.2 試驗方法
        5.2.1 種子培養(yǎng)
        5.2.2 發(fā)酵培養(yǎng)
        5.2.3 正交試驗
        5.2.4 芽孢產(chǎn)率測定
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 不同碳源對菌株 EA-300-A 發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響
        5.3.2 氮源對菌株 EA-300-A 發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響
        5.3.3 無機(jī)鹽對菌株 EA-300-A 發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響
        5.3.4 培養(yǎng)基成分正交試驗
        5.3.5 培養(yǎng)條件正交試驗
    5.4 討論
第六章 菌劑 EA-300-A 對雞飼喂效果試驗
    6.1 試驗材料
        6.1.1 試驗用雞
        6.1.2 產(chǎn)酶芽孢桿菌制劑
        6.1.3 試驗飼糧
        6.1.4 試驗儀器
        6.1.5 試驗培養(yǎng)基
    6.2 試驗方法
        6.2.1 試驗設(shè)計與動物飼養(yǎng)管理
        6.2.2 待測指標(biāo)及測定方法
            6.2.2.1 產(chǎn)酶菌劑對雞生產(chǎn)性能的影響
            6.2.2.2 產(chǎn)酶菌劑菌劑對雞十二指腸中脂肪酶活性的影響
            6.2.2.3 產(chǎn)酶菌劑菌劑對雞營養(yǎng)物質(zhì)代謝的影響
            6.2.2.4 產(chǎn)酶菌劑對雞盲腸內(nèi)菌群的影響
        6.2.3 數(shù)據(jù)處理
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 產(chǎn)酶菌劑對雞生產(chǎn)性能的影響
            6.3.1.1 產(chǎn)酶菌劑對雞腹瀉和因病死亡的影響
            6.3.1.2 平均日增重
            6.3.1.3 平均日采食量
            6.3.1.4 料重比
        6.3.2 產(chǎn)酶菌劑對十二指腸內(nèi)脂肪酶活力的影響
        6.3.3 產(chǎn)酶菌劑對糞便中物質(zhì)殘留的影響
        6.3.4 產(chǎn)酶菌劑對盲腸中菌群的影響
    6.4 討論
第七章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文
作者簡介
致謝



本文編號：3977591