由禽致病性大腸桿菌(Avain pathogenic Escherichia coli, APEC)所引起的局部或者全身性感染的疾病統(tǒng)稱為禽大腸桿菌病,其主要的臨床癥狀有胚胎死亡、大腸桿菌性敗血癥、腫頭綜合征、臍炎卵黃囊感染、大腸桿菌性肉芽腫等,該病可以產(chǎn)生多種器官病變,主要病理變化有氣囊病、臍炎、蜂窩織炎、腹膜炎、輸卵管炎、滑膜炎、全眼球炎等一系列病癥。 本研究利用臨床分離的O1、O78兩種血清型雞大腸桿菌分別制備了菌蛻疫苗,并接種雛雞進(jìn)行了免疫保護(hù)試驗。本研究取得的結(jié)果如下： 1.雞大腸桿菌O1、O78菌蛻的制備 用PCR擴(kuò)增噬菌體裂解蛋白的基因E,將其連接到pMD-18T載體,測序發(fā)現(xiàn)有一個堿基發(fā)生了突變。進(jìn)一步對突變基因進(jìn)行了定點突變,經(jīng)測序正確后與溫控表達(dá)載體pBV220連接,構(gòu)建了溶菌表達(dá)質(zhì)粒pBV220-Em,并對臨床分離的O1、O78兩種血清型雞大腸桿菌菌株分別進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)化,獲得了重組大腸桿菌01-E和大腸桿菌O78-E。將兩個重組菌株分別在29℃增菌培養(yǎng),42℃誘導(dǎo)溶菌,制備了O1、O78兩種血清型雞大腸桿菌的菌蛻。結(jié)果顯示溶菌滅活效率約為95%,一般在1h左右開始溶...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 雞大腸桿菌病研究進(jìn)展
        1.1 雞大腸桿菌流行病學(xué)特點
        1.2 雞大腸桿菌血清型
        1.3 雞大腸桿菌毒力因子研究進(jìn)展
    2 雞大腸桿菌臨床癥狀及診斷方法研究進(jìn)展
        2.1 臨床癥狀
        2.2 雞大腸桿菌病的診斷及分離與鑒定
    3 雞大腸桿菌病的防治研究進(jìn)展
        3.1 雞大腸桿菌病的藥物防治
        3.2 雞大腸桿菌病的疫苗防治
    4 菌蛻疫苗的研究進(jìn)展
        4.1 菌蛻疫苗的原理及制備
        4.2 細(xì)菌菌蛻疫苗研究進(jìn)展
        4.3 菌蛻疫苗的應(yīng)用
    5 本研究的目的、意義和主要內(nèi)容
        5.1 本研究的目的和意義
        5.2 本研究的主要內(nèi)容
第二章 雞大腸桿菌O₁和O₇₈兩種血清型重組菌株的構(gòu)建及溶菌動力學(xué)實驗
    1 目的和意義
    2 材料
        2.1 菌株和質(zhì)粒
        2.2 主要分子生物學(xué)及生化試劑
        2.3 主要溶液的配制
        2.4 主要儀器設(shè)備
    3 試驗方法
        3.1 雞大腸桿菌分離株的復(fù)蘇
        3.2 溶菌表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.3 E基因的定點突變
        3.4 構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pBV220-Em
        3.5 雞大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化
        3.6 電擊轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒的篩選和鑒定
        3.7 重組大腸桿菌的溶菌動力學(xué)實驗
    4 結(jié)果與分析
        4.1 E基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果
        4.2 克隆pMD18T-E載體鑒定
        4.3 重組質(zhì)粒測序
        4.4 質(zhì)粒pMD18T-E基因定點突變
        4.5 質(zhì)粒pMD18T-Em測序分析
        4.6 構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒pBV220-Em鑒定
        4.7 電轉(zhuǎn)化重組子的鑒定
        4.8 重組大腸桿菌的溶菌動力學(xué)實驗
    5 討論
第三章 雞大腸桿菌交叉免疫保護(hù)試驗
    1 目的和意義
    2 材料
        2.1 菌株及實驗動物
        2.2 主要分子生物學(xué)及生化試劑
        2.3 主要溶液的配制
        2.4 主要儀器設(shè)備
    3 試驗方法
        3.1 大腸桿菌復(fù)蘇及活菌數(shù)測定
        3.2 雞大腸桿菌半數(shù)致死量的測定
        3.3 雞大腸桿菌O₁、O₇₈菌株疫苗的制備
        3.4 雞大腸桿菌疫苗的安全性評價
        3.5 雞大腸桿菌疫苗免疫保護(hù)試驗
        3.6 雞大腸桿菌的攻毒后免疫保護(hù)率測定
        3.7 采血并測定血清抗體效價
    4 結(jié)果與分析
        4.1 雞大腸桿菌的復(fù)蘇及活菌計數(shù)測定
        4.2 雞大腸桿菌的半數(shù)致死量測定
        4.3 雞大腸桿菌O₁-E和O₇₈-E菌株疫苗的制備
        4.4 雞大腸桿菌疫苗的安全性評價
        4.5 雞大腸桿菌疫苗的免疫保護(hù)效果
        4.6 采血并測定血清抗體效價
    5 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3973630