Zfy (Zinc-finger Y)基因位于Y染色體的短臂上，是一段可編碼鋅指蛋白的高度保守基因序列。Zfy基因具有特定的核定位信號區(qū)域，能夠特異性的引導(dǎo)靶基因穿過核膜，定位于精子細(xì)胞核內(nèi)，可能對精子變態(tài)過程中的某些基因具有轉(zhuǎn)錄激活作用，與Y精子的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)揮有關(guān)。本研究根據(jù)Zfy基因特點，通過設(shè)計shRNA片段，對綿羊的Zfy基因進(jìn)行細(xì)胞水平上的RNAi實驗，通過qRT-PCR分析后，選取對Zfy基因mRNA表達(dá)水平抑制率最高的片段，通過睪丸注射法注射給雄性公羊，人工授精后，統(tǒng)計經(jīng)干擾后后代的性別比例。具體研究結(jié)果如下： 1.綿羊Zfy基因cDNA序列克�。阂匀撕团５腪fy基因序列為參考，分段設(shè)計3對引物，采用普通PCR技術(shù)擴(kuò)增，測序，使用DNAMAN軟件拼接及分析，首次克隆到長為2247bp的綿羊Zfy基因mRNA的拼接序列。 2.根據(jù)克隆到的綿羊Zfy基因mRNA序列，按照RNAi設(shè)計原則，針對該基因的編碼區(qū)設(shè)計并合成5對shRNA干擾片段。以pll3.7慢病毒骨架質(zhì)粒作為載體，構(gòu)建了5個靶向Zfy基因的shRNA表達(dá)載體(A-E)。經(jīng)過測序證實所構(gòu)建的5個表達(dá)載體含有合成的...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表
摘要
Abstract
論文中常用縮寫詞英漢對照表
前言
綜述部分
    1. RNA 干擾的原理
        1.1 RNAi 的發(fā)展史
        1.2 RNAi 的作用機(jī)理
        1.3 RNAi 的常用載體
        1.4 RNAi 的設(shè)計原則
    2. 性別控制技術(shù)的研究進(jìn)展
        2.1 Gadd45G 基因
        2.2 MAPK 細(xì)胞通路
        2.3 GATA4 基因
        2.4 Sry 基因
        2.5 Zfy 基因
        2.6 Sox 基因
    3. 總結(jié)和展望
    參考文獻(xiàn)
試驗研究
    實驗一 綿羊 Zfy 基因 mRNA 序列的克隆
        1. 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2. 結(jié)果與分析
            2.1 睪丸組織總 RNA 的提取
            2.2 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
            2.3 菌液 PCR 鑒定
            2.4 測序結(jié)果
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    實驗二 綿羊 Zfy 基因 shRNA 表達(dá)載體的構(gòu)建
        1. 材料與方法
            1.1 主要試劑
            1.2 主要儀器
            1.3 方法
        2. 結(jié)果與分析
            2.1 siRNA 序列的選擇
            2.2 表達(dá)載體的克隆與酶切鑒定
        3. 討論
            3.1 siRNA 的表達(dá)方法
            3.2 表達(dá)載體的選擇
            3.3 重組質(zhì)粒的鑒定
        參考文獻(xiàn)
    實驗三 綿羊 Zfy 基因體外干擾實驗
        1. 材料
            1.1 主要試劑
            1.2 主要儀器
            1.3 主要 PCR 引物
            1.4 主要實驗動物
        2. 主要實驗方法
            2.1 重組表達(dá)質(zhì)粒的制備
            2.2 生精細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
            2.3 重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染生精細(xì)胞
            2.4 測定生精細(xì)胞 Zfy 基因 mRNA 表達(dá)水平
        3. 結(jié)果與分析
            3.1 重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染生精細(xì)胞
            3.2 PCR 結(jié)果分析
            3.3 Zfy 基因 mRNA 表達(dá)水平
        4.討論
        參考文獻(xiàn)
    實驗四 Zfy 基因 shRNA 表達(dá)載體的體內(nèi) RNA 干擾試驗
        1.材料與方法
            1.1 主要試劑
            1.2 主要儀器
            1.3 主要實驗動物
            1.4 重組表達(dá)質(zhì)粒的大量制備與純化
            1.5 綿羊體內(nèi) Zfy 基因 RNAi 實驗
        2.結(jié)果與分析
            2.1 后代性別比例
            2.2 Zfx 基因 mRNA 表達(dá)水平
        3.討論
        參考文獻(xiàn)
結(jié)論
創(chuàng)新點
致謝
作者簡介



本文編號：3955737