藍舌病(Bluetongue, BT)是由呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬藍舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起，由庫蠓等昆蟲傳播的反芻動物非接觸性傳染病；主要侵害綿羊、山羊。BTV中存在大量的基因變異和抗原變異，導致其有26個不同的血清型，并且同一血清型內含有大量的變異毒株。由于不同血清型間缺乏有效的交叉免疫保護，這為有效的多價疫苗的研究帶來困難。血清型特異性診斷方法的研究對控制BT有重要意義。 BTV VP2蛋白是決定病毒血清型特異性的主要結構蛋白，在本研究中，我們通過桿狀病毒表達系統(tǒng)表達真核重組BTV16VP2蛋白，并以此為免疫原免疫BALB/c小鼠制備了兩株針對BTV16型VP2蛋白血清型特異性單克隆抗體(MAbs)。為鑒定兩株型特異性MAbs所識別的抗原表位，我們設計了87對引物(每對引物編碼16個氨基酸，87對引物覆蓋BTV16型VP2蛋白全長，相鄰兩對引物含有5個氨基酸重疊區(qū)，以最大限度保持VP2蛋白上的線性表位)，通過原核表達方法表達出87條麥芽糖結合蛋白(MBP)融合短肽，以此作為包被抗原通過間接ELISA方法篩選兩株MAbs所識別的表位區(qū)域，并利用肽掃描技...

【文章頁數】：62 頁

【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 藍舌病概述
        1.1.1 BTV 的分類地位與病原學特性
        1.1.2 當前全球范圍內 BTV 分布趨勢
        1.1.3 BT 臨床癥狀及病理變化
        1.1.4 BT 預防
        1.1.5 BTV 生命周期
        1.1.6 BTV 編碼蛋白質及生物學功能
    1.2 BTV VP2、VP5 抗原表位研究進展
    1.3 本研究的目的與意義
第二章 BTV16 VP2 蛋白血清型特異性單克隆抗體制備及抗原表位鑒定
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 細胞、質粒、病毒和實驗動物
        2.1.2 真核重組 BTV16 VP2 蛋白表達、純化及生物學活性鑒定
        2.1.3 BTV16 VP2 蛋白血清型特異性單克隆制備及特性鑒定
        2.1.4 BTV16 VP2 蛋白截短表達
        2.1.5 BTV16 VP2 蛋白血清型特異性抗原表位鑒定
        2.1.6 BTV16 VP2 蛋白血清型特異性 B 細胞表位保守性分析
        2.1.7 MAbs 與 BTV16 型病毒不同地區(qū)分離株相應表位區(qū)域的反應性
    2.2 結果
        2.2.1 BTV16 VP2 基因 PCR 擴增
        2.2.2 真核重組 BTV16 VP2 蛋白表達與純化鑒定
        2.2.3 真核重組 BTV16 VP2 蛋白生物學活性鑒定
        2.2.4 BTV16 VP2 蛋白 MAbs 生物學活性鑒定
        2.2.5 87 條 MBP 融合短肽的原核表達
        2.2.6 BTV16 VP2 蛋白 MAbs 抗原表位初步鑒定
        2.2.7 BTV16 VP2 蛋白 MAbs 抗原表位精確鑒定
        2.2.8 抗原表位保守型和特異性分析
    2.3 討論
第三章 BTV16 VP5 蛋白單克隆抗體制備及抗原表位鑒定
    3.1 實驗材料與方法
        3.1.1 細胞、質粒、病毒和實驗動物
        3.1.2 BTV16 VP5 蛋白原核表達、純化及鑒定
        3.1.3 BTV16 VP5 蛋白真核表達、純化及鑒定
        3.1.4 MBP-BTV16 VP5d41aa 和 His6-BTV16 VP5d41aa 蛋白生物活性鑒定
        3.1.5 BTV16 VP5 蛋白 MAbs 制備及特性鑒定
        3.1.6 BTV16 VP5 蛋白截短表達
        3.1.7 BTV16 VP5 蛋白抗原表位鑒定
        3.1.8 BTV16 VP5 蛋白抗原表位保守性分析
    3.2 結果
        3.2.1 MBP-BTV16 VP5 和 MBP-BTV16 VP5d41aa 蛋白原核表達分析鑒定
        3.2.2 真核重組蛋白 His6-BTV16 VP5 和 His6-BTV16 VP5d41aa 表達鑒定
        3.2.3 MBP-BTV16 VP5d41aa 和 His6-BTV16 VP5d41aa 蛋白生物活性鑒定
        3.2.4 BTV16 VP5 蛋白 MAbs 制備和特性鑒定
        3.2.5 BTV16 VP5 蛋白截短表達
        3.2.6 BTV16 VP5 蛋白抗原表位鑒定
        3.2.7 BTV16 VP5 蛋白抗原表位保守性分析
    3.3 討論
第四章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3955557