目的：本論文旨在研究豬紅細胞遞呈免疫復合物的功能,以期為課題組進一步開展動物紅細胞免疫系統(tǒng)及其分子機制的相關研究提供理論數(shù)據(jù)。方法：以長白豬為研究對象,常規(guī)分離豬肺泡巨噬細胞(PAM)及紅細胞,以熒光大腸桿菌(FITC-WT E.coli)為報告因子,構建紅細胞清除免疫復合物體外模型；運用激光共聚焦顯微鏡和流式細胞技術觀察并分析豬紅細胞對熒光桿菌的免疫粘附及熒光桿菌轉(zhuǎn)移至巨噬細胞的免疫遞呈過程；利用流式細胞技術分析豬CR1-like在紅細胞遞呈免疫復合物過程中的分子機制。結(jié)果：分離所得PAM經(jīng)復蘇培養(yǎng),于倒置顯微鏡下觀察可見細胞多呈圓形,形態(tài)大小均一,活力較好,呈半貼壁狀態(tài)。加入臺盼藍染色液,鏡檢計數(shù)得細胞存活率為97.2%；PAM復蘇培養(yǎng)體系中加入墨汁進行培養(yǎng),于倒置顯微鏡下鏡檢可見細胞內(nèi)細胞內(nèi)有吞噬顆粒,計算得PAM吞噬率為98.8%；WT E.coli經(jīng)FITC染色標記后,于正置顯微鏡下觀察可見,菌體呈短棒狀,大小為1-2gm；熒光場下,WT E.coli表現(xiàn)較強的綠色熒光,菌體熒光標記率為92.3%；激光共聚焦顯微鏡觀察豬紅細胞、PAM、熒光大腸桿菌共孵育體系可見2h5min、...

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＡＭ復蘇培養(yǎng)及其吞隨活性鏡檢結(jié)果??

一，活為較好，呈半貼壁狀態(tài)。加入臺盼藍染色液，鏡檢計數(shù)得細胞存活率為９７．２％?（如??圖１Ａ所示）。??ＰＡＭ復蘇培養(yǎng)體系中加入墨汁進行培養(yǎng)，于倒置顯微鏡下鏡檢可見細胞內(nèi)細胞內(nèi)??有吞嗤顆粒，計算得ＰＡＭ吞隨率為９８．８％?（如圖１Ｂ所示），可用于后續(xù)試驗。??隣拓．．．扣每遂....

圖２?ＷＴ?￡．ｃｏＵ的Ｆ打Ｃ標記結(jié)果??＇

ＷＴＥｃｏ／ｚ？經(jīng)Ｆ打Ｃ染色標記后，于正置顯微鏡下觀察可見，菌體呈短棒狀，大小為??１－２叫１１；巧光場下，ＷＴ表現(xiàn)較強的綠色巧光，表明菌體標記成功，且計算得菌體??巧光標記率為９２．３％?（如圖２所示）；菌體Ｗ?ＰＢＳ緩沖液重懸移至激光共聚焦顯微鏡下??進行渾滅時間檢測，可見，....

圖３?ＰＡＭ競爭性結(jié)合黃光大腸桿菌觀察結(jié)果??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＡＭ?ｃｏｍｐｅｔｉｖｅ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??

３．１激光共聚焦顯微鏡觀察ＰＡＭ競爭性結(jié)合焚光大厥桿菌??經(jīng)新鮮兔血清致敏的ＦＩＴＣ－ＷＴＥ．ＣＯ＆？先與紅細胞解育，再與肺泡巨嗤細胞共賂育，??轉(zhuǎn)入活細胞工作站，Ｗ激光共聚焦顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)移過程（圖３）。顯微鏡下觀察可見，??巧光巧菌可分別粘附于豬紅細胞表面或ＰＡＭ表面，觀察時....

圖４?ＰＡＭ競爭性結(jié)合巧光大腸桿菌流式細胞術檢測結(jié)果??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｆｌｏｗ?ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＰＡＭ?ｃｏｍｐｅｔｉｖｅ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??

３．２流式細胞術檢測ＰＡＭ競爭性結(jié)合焚光大腸桿菌??上述共贈育體系中將豬紅細化裂解，制備樣本，經(jīng)流式細胞儀檢測ＰＡＭ的平均萊??光強度。檢測結(jié)果顯示，共艇育體組ＰＡＭ平均巧光強為６３２．０４?＋?４４．８２?（如圖４Ｃ所示），??對照組ＰＡＭ的巧光強度值均值為５．３３?＋化０８?....

本文編號：3955169