豬細(xì)小病毒(porcine parvovirus,PPV)屬于細(xì)小病毒科、細(xì)小病毒屬成員,是引起母豬繁殖障礙性疾病的主要病原之一。PPV一般在豬源性生長(zhǎng)分裂旺盛的細(xì)胞中進(jìn)行增殖,感染PPV的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect,CPE)。細(xì)胞自噬作為細(xì)胞中維持穩(wěn)態(tài)的重要方式,在病毒致病過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。雖然關(guān)于細(xì)胞自噬與病毒間的相互作用機(jī)制研究已有很多報(bào)道,但細(xì)胞自噬如何調(diào)控PPV的復(fù)制,至今尚不清楚。本研究以PK-15細(xì)胞作為模式細(xì)胞,用PPV感染PK-15細(xì)胞和GFP-LC3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的PK-15細(xì)胞,western blotting檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,在熒光顯微鏡下觀測(cè)自噬體的形成。以PPV感染PK-15細(xì)胞、利用自噬誘導(dǎo)劑建立的PK-15細(xì)胞自噬模型、利用siRNA技術(shù)干擾自噬關(guān)鍵基因atg5的PK-15細(xì)胞,western blotting檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)、PPV VP2的表達(dá),Real-time Q-PCR檢測(cè)PPV的拷貝數(shù)和PPV VP2的mRNA水平。研究取得以下結(jié)果。1.以0 MOI、0.25 MOI、0.50 MO...

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1氨基酸缺乏時(shí)ULK激酶激活I(lǐng)II型磷脂酰肌醇3激酶復(fù)合物Fig1-1ULKkinasesactivatetheclassIIIPI(3)Kinautophagyfollowingaminoacidstarvation.(Nazarkoetal.2013)

圖1-1氨基酸缺乏時(shí)ULK激酶激活I(lǐng)II型磷脂酰肌醇3激酶復(fù)合物Fig1-1ULKkinasesactivatetheclassIIIPI(3)Kinautophagyfollowingaminoacidstarvation.(Naza....

圖2-1PPV感染PK-15細(xì)胞后出現(xiàn)CPE現(xiàn)象（40×）

圖2-1PPV感染PK-15細(xì)胞后出現(xiàn)CPE現(xiàn)象（40×）A:PK-15細(xì)胞；B:PPV感染24h；C:PPV感染48hFig.2-1TheCPEphenomenonafterPPVinfectedPK-15cellsA:PK-....

圖2-2PPVNS1基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果

V感染PK-15細(xì)胞后出現(xiàn)CPE現(xiàn)象（45細(xì)胞；B:PPV感染24h；C:PPV感染CPEphenomenonafterPPVinfectedPK-ls;B:PPVinfectedfor24h;C:PPVinfecte力鑒定DN....

圖2-3不同MOIPPV感染后細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)Fig.2-3Expressionofautophagy-associatedproteinafterPPVinfectedwithdifferentMOI.

分?jǐn)?shù)）gTCID50=距離比例×稀釋對(duì)數(shù)之間的差+高于50%病變的稀釋度對(duì)數(shù)據(jù)上述公式，計(jì)算得到PPV的TCID50值為：TCID50=10-6.194/0.1mL。：將PPV稀釋106.194倍后感染100μL可使50%細(xì)胞發(fā)生病變。不同MOIPPV....

本文編號(hào)：3953593