發(fā)布時間：2024-04-12 06:03

　　為構(gòu)建表達禽β-防御素6(AvBD6)的重組乳酸菌并檢測重組蛋白AvBD6(rAvBD6)的免疫調(diào)節(jié)活性,本研究根據(jù)GenBank AvBD6的參考序列,經(jīng)過密碼子優(yōu)化后合成了AvBD6:AvBD6(G₄S)₃:AvBD6(G₄S)₃ AvBD6(G₄S)₃ AvBD6(4×AvBD6)串聯(lián)基因序列,構(gòu)建了表達rAvBD6的食品級乳酸菌表達菌株。經(jīng)western blot檢測顯示,目的蛋白呈可溶性表達于乳酸菌細胞質(zhì)中。以重組乳酸菌裂解上清為重組蛋白,與雞外周血單個核細胞進行體外相互作用試驗,熒光定量PCR結(jié)果顯示,經(jīng)r Av BD6刺激雞外周血單個核細胞能夠顯著提高IL-10(p<0.0001)、IL-12p70(p<0.05)轉(zhuǎn)錄水平;重組蛋白與雞巨噬細胞體外相互作用試驗的熒光定量PCR結(jié)果顯示,經(jīng)rAvBD6處理的雞巨噬細胞也能夠提高IL-10、IL-12p70的轉(zhuǎn)錄水平(p<0.05);重組蛋白刺激干擾素調(diào)節(jié)因子IRF信號激活報告細...

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【部分圖文】：

圖1重組乳酸菌的PCR鑒定結(jié)果

以構(gòu)建的重組乳酸菌pPG612-AvBD6HA/NZ3900細菌培養(yǎng)液為模板，利用引物tAvBD6-F/R進行PCR鑒定，結(jié)果顯示，擴增片段大小與預(yù)期相符，陰性對照無目的條帶（圖1），經(jīng)測序鑒定序列正確。表明，正確構(gòu)建了重組質(zhì)粒pPG612-AvBD6HA和重組乳酸菌....

圖2rAvBD6融合蛋白表達的westernblot鑒定結(jié)果

重組乳酸菌pPG612-AvBD6HA/NZ3900經(jīng)Nisin誘導(dǎo)后，westernblot鑒定結(jié)果顯示，rAvBD6大小約為21ku，與預(yù)期相符，陰性對照無條帶（圖2）。BSA法定量結(jié)果顯示，rAvBD6含量為33μg/mL。表明AvBD6在重組乳酸菌p....

圖4rAvBD6刺激HD11細胞后細胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平檢測結(jié)果

rAvBD6刺激雞巨噬細胞24h，采用熒光定量PCR對細胞中IL-10和IL-12p70的mRNA的轉(zhuǎn)錄水平定量分析結(jié)果顯示，rAvBD6可以刺激雞巨噬細胞產(chǎn)生較高水平IL-10(mRNA轉(zhuǎn)錄水平為6.62）、IL-12p70(mRNA轉(zhuǎn)錄水平為2.28），并且與....

圖3rAvBD6刺激PBMCs后細胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測結(jié)果

利用rAvBD6刺激雞外周血單個核細胞24h，采用SYBYGreenⅠ熒光定量PCR對細胞中IL-10和IL-12p70的mRNA的轉(zhuǎn)錄水平進行定量分析。結(jié)果顯示：rAvBD6刺激外周血單個核細胞24h后，與陽性對照組和陰性對照組相比產(chǎn)生了高水平的IL-10[m....

本文編號：3951776