抗生素最開始是作為促生長添加劑使用，能顯著促進(jìn)動(dòng)物生長，提高飼料報(bào)酬，并起到預(yù)防疾病的作用。但是伴隨著抗生素在動(dòng)物生產(chǎn)中的長期、不合理使用，越來越多的負(fù)面影響也日漸突出，如抗生素耐藥性及畜產(chǎn)品中的殘留問題等。因此，越來越多的研究開始關(guān)注抗生素替代品的開發(fā)。黃芪多糖（Astragalus Polysaccharides，APS）是中草藥黃芪的重要組成成分，具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)活性，且無殘留、毒副作用小。本研究分4個(gè)試驗(yàn)，采用體外檢測和體內(nèi)驗(yàn)證相結(jié)合的方法，探討APS的抗炎活性，并系統(tǒng)研究硫酸化修飾對(duì)APS抗炎活性的影響，以期為抗生素替代品的研發(fā)提供理論依據(jù)。 試驗(yàn)一黃芪多糖的體外抗炎活性研究 本試驗(yàn)采用脂多糖（LPS）刺激建立Caco2細(xì)胞體外炎癥模型，研究添加方式和劑量對(duì)APS抗炎效果的影響。APS（0、25、50、100和200μg/mL）和1μg/mL LPS以下述三種方式添加：（1）治療添加組，先用LPS刺激24h，再用APS孵育24h；（2）預(yù)防添加組，先用APS孵育24h，再用LPS刺激24h；（3）同時(shí)添加組，將LPS和APS混合后共同孵育細(xì)胞48h。用RT-qPCR...

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摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 黃芪多糖的提取方法
        1.1.1 水煮醇沉法
        1.1.2 微波輔助提取法
        1.1.3 酶解法
        1.1.4 超聲波法
        1.1.5 堿醇法
    1.2 黃芪多糖純化方法
    1.3 黃芪多糖的化學(xué)組成及結(jié)構(gòu)信息
    1.4 黃芪多糖的生物學(xué)活性
        1.4.1 APS 的抗炎活性
        1.4.2 APS 對(duì)免疫器官的影響
        1.4.3 APS 對(duì)免疫細(xì)胞的影響
        1.4.4 APS 對(duì)免疫分子的影響
        1.4.5 APS 的抗病毒和抗腫瘤作用
        1.4.6 APS 的抗氧化作用
    1.5 多糖的結(jié)構(gòu)修飾與構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展
        1.5.1 硫酸化修飾
        1.5.2 磷酸化修飾
        1.5.3 乙�；揎�
        1.5.4 硒化修飾
        1.5.5 羧甲基化修飾
        1.5.6 烷基化修飾
    1.6 腸黏膜屏障研究進(jìn)展
    1.7 TLR 信號(hào)通路
        1.7.1 簡介
        1.7.2 信號(hào)分子
        1.7.3 作用
    1.8 研究問題的提出及研究內(nèi)容
        1.8.1 研究問題的提出
        1.8.2 研究內(nèi)容
        1.8.3 技術(shù)路線
第二章 黃芪多糖的體外抗炎活性研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 儀器
        2.1.3 試劑配置
        2.1.4 細(xì)胞復(fù)蘇和培養(yǎng)
        2.1.5 APS 的細(xì)胞毒性試驗(yàn)
        2.1.6 APS 的抗炎試驗(yàn)
        2.1.7 Caco2 細(xì)胞單層跨膜通透性檢測
        2.1.8 RT-qPCR 方法測定 mRNA 相對(duì)表達(dá)量
        2.1.9 Western Blot 檢測蛋白表達(dá)
        2.1.10 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 APS 的細(xì)胞毒性試驗(yàn)
        2.2.2 治療添加組 APS 抗炎活性
        2.2.3 預(yù)防添加組 APS 抗炎活性
        2.2.4 同時(shí)添加組 APS 抗炎活性
        2.2.5 APS 對(duì) LPS 刺激 Caco2 細(xì)胞單層 Isc 變化的影響
        2.2.6 APS 對(duì) LPS 刺激的 Caco2 細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá)的影響
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 黃芪多糖的硫酸化修飾及其細(xì)胞毒性分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 儀器
        3.1.3 APS 的硫酸化修飾
        3.1.4 結(jié)構(gòu)分析
        3.1.5 SAPS 的細(xì)胞毒性試驗(yàn)
        3.1.6 數(shù)據(jù)分析
    3.2 結(jié)果與討論
        3.2.1 SAPS 的紫外光譜
        3.2.2 SAPS 的紅外光譜
        3.2.3 SAPS 的細(xì)胞毒性試驗(yàn)
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 硫酸化黃芪多糖的體外抗炎活性研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 儀器
        4.1.3 液體配置
        4.1.4 SAPS 的抗炎試驗(yàn)
        4.1.5 RT-qPCR 方法測定相關(guān)基因 mRNA 相對(duì)表達(dá)量
        4.1.6 Western Blot 方法分析相關(guān)蛋白表達(dá)
        4.1.7 統(tǒng)計(jì)方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 SAPS 對(duì) Caco2 細(xì)胞炎癥因子 mRNA 表達(dá)的影響
        4.2.2 SAPS 對(duì)緊密連接蛋白和 TLR4 mRNA 和蛋白表達(dá)的影響
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 黃芪多糖和硫酸化黃芪多糖對(duì) LPS 刺激肉仔雞的抗炎及免疫調(diào)節(jié)活性研究
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及處理
        5.1.2 樣品采集和處理
        5.1.3 檢測指標(biāo)及方法
        5.1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    5.2 試驗(yàn)結(jié)果
        5.2.1 肉仔雞生產(chǎn)性能
        5.2.2 肉仔雞免疫器官指數(shù)
        5.2.3 肉仔雞血液指標(biāo)
        5.2.4 肉仔雞外周血淋巴細(xì)胞增殖
        5.2.5 肉仔雞外周血淋巴細(xì)胞上清液指標(biāo)
        5.2.6 肉仔雞腸道形態(tài)
        5.2.7 肉仔雞腸道免疫細(xì)胞
        5.2.8 肉仔雞腸道黏膜炎癥因子 mRNA 表達(dá)
        5.2.9 肉仔雞腸道黏膜緊密連接蛋白和 TLR4 mRNA 表達(dá)
    5.3 討論
    5.4 小結(jié)
第六章 總體結(jié)論與建議
    6.1 本研究的主要結(jié)論
    6.2 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 有待進(jìn)一步研究的問題
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
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本文編號(hào)：3951028