旨在研究AMPK激活劑二甲雙胍(metformin,Met)和阿卡地新(acadesine,AICAR)對(duì)綿羊精液冷凍保存效果的影響。本研究首先在冷凍基礎(chǔ)稀釋液中分別添加不同濃度(0、100、200、300、400、500μmol·L^-1)的Met和AICAR,冷凍解凍后根據(jù)精子活力、運(yùn)動(dòng)性能和結(jié)構(gòu)完整性指標(biāo)篩選出最佳的添加濃度(400μmol·L^-1 Met、200μmol·L^-1 AICAR);然后分別使用不同的冷凍稀釋液(對(duì)照組:稀釋液;Met組:含400μmol·L^-1 Met的稀釋液;AICAR組:含200μmol·L^-1 AICAR的稀釋液)冷凍精液,解凍后檢測(cè)精子中AMPK蛋白表達(dá)、頂體酶活性、代謝指標(biāo)、線粒體功能以及抗氧化酶活性。結(jié)果表明,稀釋液中添加400μmol·L^-1 Met和200μmol·L^-1AICAR均可顯著提高解凍后精子活力、運(yùn)動(dòng)性能及精子結(jié)構(gòu)完整性(P<0.05),其中400μmol·L

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圖1精液冷凍保存試驗(yàn)技術(shù)路線圖

將采集后的精液置于恒溫箱中(37℃)帶回實(shí)驗(yàn)室,立即進(jìn)行處理。精液冷凍保存試驗(yàn)技術(shù)路線見(jiàn)圖1。1.2.2精液品質(zhì)相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)

圖2顯微鏡觀察精子頂體完整性和質(zhì)膜完整性

通過(guò)向精液冷凍稀釋液中添加終濃度為0、100、200、300、400、500μmol·L-1Met或AICAR來(lái)探究AMPK激活劑對(duì)冷凍精液解凍后精子結(jié)構(gòu)完整性的影響,顯微鏡下觀察精子,如圖2A所示,黃色箭頭所指為頂體完整精子,背景為淺藍(lán)色,核為深藍(lán)色;紅色箭頭所指為頂體不完....

圖3AMPK及p-AMPK在綿羊精子上的表達(dá)定位

頂體反應(yīng)對(duì)于精卵融合以及受精過(guò)程至關(guān)重要,完整的精子結(jié)構(gòu)是精卵結(jié)合的重要前提,也是卵子成功受精的必要條件[11],所以精子的頂體完整率和質(zhì)膜完整性成為檢測(cè)精液品質(zhì)的重要指標(biāo)。研究表明,冷凍解凍后,80%綿羊精子發(fā)生質(zhì)膜腫脹并且還會(huì)發(fā)生頂體外膜腫脹,導(dǎo)致內(nèi)容物外泄。精子頭部的頂體由....

圖4AMPK激活劑對(duì)冷凍保存后精子中AMPK和p-AMPK蛋白表達(dá)的影響

精子頭部的頂體由細(xì)胞核周圍的高爾基體同源性膜形成,含有多種與精卵結(jié)合相關(guān)的水解酶,其中,頂體酶是一種特殊的絲氨酸蛋白水解酶,主要參與調(diào)控頂體中其他酶的釋放[15]。大部分的頂體酶分布于頂體內(nèi)膜和赤道膜上,而精子的冷凍保存處理會(huì)使頂體膜受到結(jié)構(gòu)和功能的損傷,因此,不可避免地會(huì)造成頂....

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