抗繆勒氏管激素(Anti-Müllerian Hormone;AMH)又稱繆勒氏管抑制物,是胚胎發(fā)育階段控制性腺分化的重要激素之一。主要負責(zé)雄性動物早期胚胎輸卵管性腺前體的退化,以及雌性家禽早期胚胎右側(cè)輸卵管的退化。但是AMH在胚胎發(fā)育早期階段對性腺分化和輸卵管前體退化的分子學(xué)機制依然尚未明確。近年來基因組精確編輯技術(shù)的突破性進展為AMH功能研究提供了良好的技術(shù)支持。尤其是CRISPR/Cas9的出現(xiàn),使得內(nèi)源性影響AMH的表達成為可能。作為RNA引導(dǎo)的、具有切割酶活性的核酸酶系統(tǒng),CRISPR/Cas9的工作效率很大程度上依賴于sgRNA的靶向效率和外源核苷酸的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。因此本次試驗從提高sgRNA的靶向能力和SpCas9的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率兩方面對靶向雞AMH基因的CRISPR/Cas9敲除系統(tǒng)進行優(yōu)化,從而提高CRISPR/Cas9對雞AMH基因的編輯效率。1、為了提高sgRNA對雞AMH基因的靶向效率,本試驗構(gòu)建了靶向雞AMH基因第一外顯子的成對sgRNA敲除載體pX330-U6-AMHsg1_dBsaI-CBh-SpCas9和pX330-U6-AMHsg2_...

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圖1-1繆勒氏管退化的調(diào)控機制圖解(Allardetal.,2000)

圖1-1繆勒氏管退化的調(diào)控機制圖解(Allardetal.,2000tionmechanismduringcranialMüllerianductregression(A性腺發(fā)育中的作用H的功能與哺乳動物類似，在胚胎發(fā)育時期會引ehringeretal....

圖2-1雞AMH基因靶位點的選擇Fig.2-1SelectionofCas9targetsiteonChickenAMHgene

pCAG-FGCAACGTGCTGGTTATTGTGAMH-TA-FGTGTGCCGCCTGAAGATGGAAMH-TA-RAATGCTGCTGCTCCAGAACCAA2.2試驗方法2.2.1雞AMH基因敲除表達載體構(gòu)建通過美國國立生物技術(shù)信息中心網(wǎng)站（https:....

圖2-2雞AMH敲除表達載體的構(gòu)建Fig.2-2ConstructionofvectorforKOChickenAMHgene用引物AMHsg1-F/AMHsg1-R（表2-1）進行Annealing獲得20bp靶向雞基因組

圖2-2雞AMH敲除表達載體的構(gòu)建Fig.2-2ConstructionofvectorforKOChickenAMHgene用引物AMHsg1-F/AMHsg1-R（表2-1）進行Annealing獲得20bp靶向雞基因MH-target1....

圖2-3合成sgRNA的退火擬合程序Fig.2-3ProcedureforsgRNAannealing

圖2-2雞AMH敲除表達載體的構(gòu)建Fig.2-2ConstructionofvectorforKOChickenAMHgene引物AMHsg1-F/AMHsg1-R（表2-1）進行Annealing獲得20bp靶向雞target1位置的s....

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