本試驗旨在比較藏豬和DLY豬抗病毒相關(guān)模式識別受體基因表達差異,探明VD的抗病毒效果及其對基因表達的影響,以揭示不同品種豬抗病力差異和VD抗病的分子機制。首先應(yīng)用生物信息學(xué)和熒光定量方法,在克隆了藏豬維甲酸誘導(dǎo)基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)、β干擾素啟動子刺激分子1(IPS-1)、Toll樣受體3(TLR3)基因cDNA序列基礎(chǔ)上,研究了RIG-Ⅰ、IPS-1和TLR3基因在藏豬和DLY豬不同組織的表達差異；然后建立了PRRS弱毒苗攻毒模型,研究藏豬和DLY豬抗病毒先天性免疫應(yīng)答的差異；最后通過體外和體內(nèi)試驗探索了VD的抗病毒作用及其分子機制。本研究包括以下四個試驗： 試驗一DLY豬和藏豬RIG-Ⅰ、IPS-1和TLR3基因表達差異的研究 選取同一生長階段、體重相近的純種藏豬和DLY雜交豬各6頭(公母各半),屠宰后取其心、肝、脾、肺、腎、十二指腸、空腸、回腸、支氣管淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)、肌肉和脂肪等組織,提取總RNA,克隆藏豬RIG-Ⅰ、IPS-1和TLR3基因cDNA序列,用Real-time PCR方法檢測RIG-Ⅰ、IPS-1和TLR3mRNA表達水平。結(jié)果如下： (1)藏豬...

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【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略符號表
目錄
前言
文獻綜述
    1 動物的抗病毒先天性免疫
    2 細胞內(nèi)的模式識別受體
        2.1 TLR受體的結(jié)構(gòu)和功能
        2.2 TLR信號通路
        2.3 RIG-I的結(jié)構(gòu)和功能
        2.4 RIG-I信號通路
    3 VD研究進展
        3.1 VD在動物體內(nèi)的代謝
        3.2 VD的生物學(xué)功能
        3.3 VD與免疫功能的調(diào)節(jié)
        3.4 VD免疫調(diào)節(jié)機制
    4 存在的問題
    5 本研究的目的、內(nèi)容和意義
    6 技術(shù)路線
試驗一 DLY和藏豬RIG-I、IPS-1和TLR3基因表達差異的研究
    1 材料和方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗操作
        1.3 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 RNA質(zhì)量
        2.2 藏豬RIG-I、IPS-1和TLR3基因克隆與測序
        2.3 藏豬RIG-I、IPS-1和TLR3氨基酸序列分析及系統(tǒng)進化樹構(gòu)建
        2.4 管家基因與目的基因的標準曲線和擴增曲線
        2.5 RIG-I、IPS-1和TLR3基因組織表達差異
        2.6 RIG-I、IPS-1和TLR3基因品種表達差異
    3 討論
        3.1 藏豬RIG-I、IPS-1和TLR3基因克隆
        3.2 RIG-I、IPS-1和TLR3基因組織表達差異
        3.3 RIG-I、IPS-1和TLR3基因的品種表達差異
    4 小結(jié)
試驗二 PRRS弱毒苗對DLY和藏豬RIG-I、IPS-1和TLR3基因表達的影響
    1 材料和方法
        1.1 試驗動物與試驗設(shè)計
        1.2 免疫處理
        1.3 飼糧配制及營養(yǎng)水平
        1.4 飼養(yǎng)管理
        1.5 血樣收集
        1.6 屠宰取樣
        1.7 考察指標和測定方法
        1.8 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 PRRS弱毒苗攻毒模型的建立
        2.2 不同處理因素對生產(chǎn)性能的影響
        2.3 不同處理因素對細胞因子的影響
        2.4 不同處理對免疫球蛋白的影響
        2.5 不同處理對RIG-I、IPS-1和TLR3基因表達的影響
    3 討論
        3.1 PRRS弱毒苗攻毒模型的建立
        3.2 PRRS弱毒苗對藏豬和DLY豬生產(chǎn)性能的影響
        3.3 PRRS弱毒苗對藏豬和DLY豬細胞因子的影響
        3.4 PRRS弱毒苗對藏豬和DLY豬免疫球蛋白的影響
        3.5 PRRS弱毒苗對藏豬和DLY豬RIG-I、IPS-1和TLR3基因表達的影響
    4 小結(jié)
試驗三 VD對感染RV IPEC-J2細胞TLR3和RIG-I及其下游信號分子基因表達與IFN-B蛋白表達的影響
    1 材料和方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗設(shè)計
        1.3 試驗操作
        1.4 考察指標和測定方法
        1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 細胞模型的建立
        2.2 VD對RV增殖和細胞增殖的影響
        2.3 RV感染對CYP27B1 mRNA表達的影響
        2.4 RV感染對細胞上清液中1,25D₃濃度影響
        2.5 不同處理對RIG-I、IPS-1、TLR3、ISG15和IFN-β基因表達及IFN-β蛋白的影響
        2.6 ITRA對RIG-I、IPS-1、ISG15、IFN-β、TLR3基因表達及IFN-β蛋白的影響
    3 討論
        3.1 細胞攻毒模型的建立
        3.2 不同處理對CYP27B1基因表達及上清液中1,25D₃的影響
        3.3 不同處理對RIG-I、IPS-1、TLR3、ISG15、IFN-β基因表達及IFN-β蛋白的影響
        3.4 ITRA對RIG-I、IPS-1、TLR3、ISG15、IFN-β基因表達及IFN-β蛋白的影響
    4 小結(jié)
試驗四 VD對感染RV藏豬和DLY豬腸道TLR3和RIG-I及下游信號分子基因表達的影響
    1 材料和方法
        1.1 試驗動物與試驗設(shè)計
        1.2 RV收毒
        1.3 免疫處理
        1.4 飼糧配制及營養(yǎng)水平
        1.5 飼養(yǎng)管理
        1.6 血樣收集
        1.7 屠宰取樣
        1.8 考察指標和測定方法
        1.9 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 動物模型的建立
        2.2 不同處理對生產(chǎn)性能的影響
        2.3 不同處理對絨毛高度和隱窩深度的影響
        2.4 不同處理對細胞因子的影響
        2.5 不同處理對CYP27B1基因表達及血清中1,25D₃水平的影響
        2.6 不同處理對RIG-I、IPS-1、ISG15、IFN-β和TLR3基因表達的影響
    3 討論
        3.1 RV攻毒模型的建立
        3.2 不同處理對生產(chǎn)性能的影響
        3.3 不同處理對血清細胞因子的影響
        3.4 不同處理對CYP27B1基因表達和血清1,25D₃濃度的影響
        3.5 不同處理對RIG-I、IPS-1、ISG15、IFN-β和TLR3基因表達的影響
    4 小結(jié)
總體討論、結(jié)論及有待于進一步研究的問題
    1 總體討論
    2 主要結(jié)論
    3 創(chuàng)新點
    4 有待于進一步研究的問題
附錄
參考文獻
致謝
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本文編號：3943756