豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、豬輪狀病毒(Porcine rotavirus,PoRV)以及豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis of pig,TGEV)是國(guó)內(nèi)規(guī)模化養(yǎng)豬業(yè)中引起仔豬腹瀉的最常見(jiàn)的病毒性病原,在實(shí)際養(yǎng)豬生產(chǎn)中給哺乳仔豬帶來(lái)極大的危害,以及較高的致死率。臨床上急需要一種有效地能夠同時(shí)鑒別診斷三種病毒性病原的檢測(cè)方法。本研究首次構(gòu)建了可同時(shí)檢測(cè)PEDV、TGEV和PoRV的診斷基因芯片,主要研究?jī)?nèi)容包括下面三個(gè)方面：1.探針基因的克隆、鑒定與序列分析本研究設(shè)計(jì)并合成了PEDV、TGEV與PoRV的6對(duì)特異性引物,然后,采用PCR方法擴(kuò)增并得到了6種特異性的探針基因片段PEDV-PM (421bp), PEDV-PS (474bp), TGEV-TN (362bp), TGEV-TS (276bp), PORV-NSP4 (270bp), PoRV-VP7 (381bp),分別克隆于PMD-19T載體,并對(duì)其進(jìn)行測(cè)序鑒定,結(jié)果表明：連接與載體的DNA片段為本研究所需的目的...

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮寫說(shuō)明
文獻(xiàn)綜述
    1 豬傳染性胃腸炎診斷技術(shù)研究進(jìn)展
        1.1 血清學(xué)診斷技術(shù)
        1.2 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)
    2 流行性腹瀉診斷技術(shù)的研究進(jìn)展
        2.1 免疫血清學(xué)診斷方法
        2.2 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)
    3 輪狀病毒診斷技術(shù)研究進(jìn)展
        3.1 經(jīng)典病原檢測(cè)技術(shù)
        3.2 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)
        3.3 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)
    4 基因芯片及在疾病檢測(cè)中的應(yīng)用
        4.1. 基因芯片概述
        4.2 基因芯片制備的基本流程
        4.3 基因芯片在疾病檢測(cè)中的應(yīng)用
    5 研究目的及意義
第一章 TGEV、PEDV和PoRV探針的克隆與分析
    1 材料
        1.1 菌種與病毒
        1.2 載體與菌株
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2 PEDV探針基因的制備
        2.3 TGEV、PoRV重組質(zhì)粒菌的鑒定及探針的制備
        2.4 重組質(zhì)粒的PCR鑒定
        2.5 核苷酸序列測(cè)定和同源性分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 PEDV的PM和PS探針基因擴(kuò)增結(jié)果
        3.2 TGEV和PoRV探針基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.3 重組質(zhì)粒PCR鑒定結(jié)果及基因序列分析
    4 討論
        4.1 探針基因的選擇
        4.2 引物的設(shè)計(jì)
        4.3 探針基因的PCR擴(kuò)增、克隆與鑒定
        4.4 探針基因的DNA序列分析
    5 小結(jié)
第二章 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的構(gòu)建
    1 材料
        1.1 探針基因重組質(zhì)粒
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 探針及定位基因的制備
        2.2 基因芯片的制備
        2.3 靶基因的制備
        2.4 基因芯片檢測(cè)的操作程序
    3 結(jié)果與分析
        3.1 探針及定位基因的不同純化方法的選擇比較結(jié)果
        3.2 探針基因純化及濃度測(cè)定
    4 討論
        4.1 基因芯片載體的選擇
        4.2 基因芯片檢測(cè)技術(shù)的特點(diǎn)
        4.3 探針的制備
        4.4 靶基因的標(biāo)記
        4.5 基因芯片雜交結(jié)果判定
    5 小結(jié)
第三章 PEDV-TGEV-PoRV檢測(cè)基因芯片的應(yīng)用研究
    1 材料
        1.1 探針基因重組質(zhì)粒
        1.2 毒株
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
    2 方法
        2.1 靶基因的多重標(biāo)記體系的建立
        2.2 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的特異性試驗(yàn)
        2.3 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的靈敏性試驗(yàn)
        2.4 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的重復(fù)使用試驗(yàn)
        2.5 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片保存期試驗(yàn)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 探針基因多重PCR標(biāo)記條件優(yōu)化結(jié)果
        3.2 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的特異性試驗(yàn)
        3.3 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的敏感性試驗(yàn)
        3.4 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        3.5 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的保存期試驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
        4.1 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的特異性
        4.2 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的敏感性
        4.3 PEDV-TGEV-PoRV診斷基因芯片的重復(fù)利用
    5 小結(jié)
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄一：探針基因的測(cè)序結(jié)果
附錄二：試劑的配置方法



本文編號(hào)：3941390