毛色是毛用動物重要的經(jīng)濟(jì)性狀,哺乳動物毛色都是由黑色素細(xì)胞產(chǎn)生黑色素形成的,黑色素種類和相對數(shù)量決定了動物被毛有由深到淺多種顏色。黑色素的生成與毛囊的生長周期有著密切的聯(lián)系。毛囊生長周期分為：生長期、退行期和靜止期。TGF-β1基因通過抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡控制毛囊向退行期轉(zhuǎn)變。成熟的microRNAs (miRNAs)是21-24個核苷酸長度的非編碼RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)調(diào)控靶基因的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)室前期篩選出miR-663在不同毛色羊駝皮膚組織中具有差異表達(dá)。本研究的目的是鑒定miR-663的靶基因和研究miR-663在黑色素合成過程中的作用。研究內(nèi)容：(1)利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測和篩選miR-663的靶基因。(2)靶基因TGF-β1的基因克隆表達(dá)及定位分析。(3)雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)驗(yàn)證miR-663的靶基因。(4)利用瞬時轉(zhuǎn)染miR-663模擬物(miR-663mimic和]miR-663inhibitor)在羊駝黑色素細(xì)胞中過表達(dá)和減低表達(dá)miR-663;利用qRT-PCR和Western blot檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染后TGF-β1Smad3、Smad4、Smad7和黑色素合成...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖1-3miRNAs的生物合成過程

圖1-3miRNAs的生物合成過程Fig.1-3TheBiogenesisofmiRNAs3.2miRNA的功能3.2.1miIlNA作用機(jī)制miRNA通過與祀mRNA的3’UTR不完全互補(bǔ)配對，抑制IEmRNA翻譯或引起祀mRNA的降解。在植物中，多數(shù)miRNA可....

圖1-4TGF-p信號通路Fig.1-4TGF-Psignalingpathways

引起TGF-pRI、R-Smad和Smad4的降解，負(fù)調(diào)控TGF-P信號轉(zhuǎn)導(dǎo)【78]。4.2.2非依賴Smad蛋白的TGF-P信號轉(zhuǎn)導(dǎo)TGF-P活化蛋白激酶是研究較多的TGF-P信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(Erk)X-Jun氨基端激酶和p38促分裂原活化蛋白激酶途徑丨79....

圖3-2-6TGF-pl基因在山羊不同組織中的表達(dá)分析

2.2.2TGF-pl基因在山羊不同組織中的表達(dá)根據(jù)NCBI上公布的山羊TGF-pi基因序列設(shè)計(jì)合成用于定量檢測TGF-pi基因特異性引物，用Trizol法提取山羊不同組織中的總RNA，合成cDNA。利用qRT-PC技術(shù)對TGF-pl基因在山羊的皮膚、腎、肝、大腦、睪丸和淋巴中....

圖3-3-2293T細(xì)胞中miR-663mimic和miR-663inhibitor對勞光素酶表達(dá)活性的影響

miR-663inhibitor圖3-3-2293T細(xì)胞中miR-663mimic和miR-663inhibitor對勞光素酶表達(dá)活性的影響Fig.3-3-2Luciferaseactivityof293TcelltransfectionmiR-663mi....

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