<正>引言坦布蘇病毒(Tembusu virus,TMUV)感染是2010年在我國華東地區(qū)突然出現(xiàn)的一種新發(fā)傳染病,可導(dǎo)致種鴨和蛋鴨產(chǎn)蛋大幅度下降,其發(fā)生和流行給我國養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。E蛋白是TMUV的囊膜蛋白,可誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生并與之結(jié)合。本研究旨在制備針對E蛋白的單克隆抗體,為探究TMUV的免疫保護(hù)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。材料與方法

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圖１重組蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析（Ａ）及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析（Ｂ）Ｆｉｇ．１ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（Ａ）ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ（Ｂ）ａｎａｌｙｓｅｓｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＥｐｒｏｔｅｉｎ

能穩(wěn)定分泌抗Ｅ蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，它們分別被命名為１Ｆ３、１Ｇ２、１Ｂ１１、２Ａ５、３Ｂ６和４Ｆ９。２．２．１單克隆抗體的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ檢測Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ結(jié)果（見圖２）顯示，６株單克隆抗體均與原核表達(dá)的Ｅ蛋白發(fā)生反應(yīng)，而與空載體表達(dá)菌不反應(yīng)。２．２．２單克隆抗體的....

圖２單克隆抗體的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ檢測Ｆｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｂｙＤｏｔ－ＥＬＩＳＡ

蛋白以包涵體的形式表達(dá)，分子質(zhì)量約為６０ｋｕ（見圖１Ａ）。Ｗｅｓ－ｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ結(jié)果顯示，表達(dá)的重組Ｅ蛋白能夠與鴨坦布蘇病毒陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)（見圖１Ｂ）。２．２單克隆抗體的免疫活性分析經(jīng)間接ＥＬＩＳＡ方法篩選及３次連續(xù)克隆化，共獲得６株能穩(wěn)定分泌抗Ｅ蛋白單克隆抗體的雜交....

圖３單克隆抗體的Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析Ｆｉｇ．３ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｂｙＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ

Ｂ）。２．２單克隆抗體的免疫活性分析經(jīng)間接ＥＬＩＳＡ方法篩選及３次連續(xù)克隆化，共獲得６株能穩(wěn)定分泌抗Ｅ蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，它們分別被命名為１Ｆ３、１Ｇ２、１Ｂ１１、２Ａ５、３Ｂ６和４Ｆ９。２．２．１單克隆抗體的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ檢測Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ結(jié)果（見圖２）顯示，６....

圖４單克隆抗體的ＩＦＡ鑒定

２．２．３單克隆抗體的ＩＦＡ鑒定ＩＦＡ結(jié)果顯示，６株單克隆抗體均與鴨坦布蘇病毒感染的細(xì)胞呈陽性反應(yīng)并產(chǎn)生綠色熒光信號，且熒光信號位于細(xì)胞質(zhì)中；對照組無綠色熒光信號（見圖４）。圖４單克隆抗體的ＩＦＡ鑒定Ｆｉｇ．４Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏ....

本文編號：3934815