豬巨細胞病毒(Porcine cytomegalovirus, PCMV)可引起仔豬包涵體鼻炎,流產(chǎn)或者新生仔豬死亡。目前,該病毒已廣泛存在于世界各地,其血清陽性率均可達90%以上。由于PCMV體外培養(yǎng)技術(shù)尚不成熟,對PCMV的研究相對較少,國外的研究主要集中在異種器官移植,研究表明,潛在的PCMV可在異種器官移植中被激活,并在此期間大量的繁殖,從而產(chǎn)生免疫抑制；在體外,PCMV的感染可激活內(nèi)皮細胞而產(chǎn)生消耗性凝血障礙,但其在體內(nèi)能否產(chǎn)生相應(yīng)的作用還有待證實。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增檢測方法(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是一種恒溫核酸擴增方法,只需在恒溫條件下保溫幾十分鐘就可快速完成核酸的擴增,可用于病原的快速檢測。本研究擬針對PCMVgB基因建立檢測豬巨細胞病毒的LAMP方法,結(jié)果顯示可用于新型PCMV檢測試劑盒的研發(fā),以期能夠?qū)CMV進行快速、簡便的檢測。本研究還利用所建方法開展了對四川省多地區(qū)PCMV分子流行病學調(diào)查,調(diào)查結(jié)果對PCMV綜合防控及凈化與異種器官移植的選擇等具有重要意義。本實驗對PCMV gB基因進行了以下研究：...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1 PCMV
        1.1 PCMV的概述
        1.2 PCMV的病原學
        1.3 PCMV的流行病學
        1.4 PCMV的蛋白及其功能
        1.5 PCMV的致病機理
        1.6 PCMV的臨床癥狀
        1.7 PCMV的病理變化
        1.8 PCMV的診斷技術(shù)
        1.9 PCMV的防治
    2 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)
        2.1 LAMP的原理
        2.2 LAMP的擴增特點
        2.3 LAMP的不足與對策
        2.4 LAMP的應(yīng)用
    3 研究的目的與意義
第二章 豬巨細胞病毒的環(huán)介導(dǎo)的等溫擴增檢測方法的建立
    1 材料
        1.1 實驗材料
        1.2 主要儀器
        1.3 主要溶液及配制
    2 實驗方法
        2.1 LAMP法引物設(shè)計及合成
        2.2 LAMP法反應(yīng)體系的優(yōu)化
        2.3 LAMP法反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.4 LAMP法特異性試驗
        2.5 LAMP法敏感性試驗
        2.6 重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗
    3. 實驗結(jié)果
        3.1 LAMP法反應(yīng)體系的優(yōu)化結(jié)果
        3.2 反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.3 LAMP方法特異性檢測結(jié)果
        3.4 LAMP方法靈敏度檢測結(jié)果
        3.5 重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗結(jié)果
        3.6 經(jīng)反應(yīng)體系和反應(yīng)條件優(yōu)化后建立的PCMV LAMP檢測方法
    4. 討論
        4.1 引物設(shè)計
        4.2 反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)化
        4.3 LAMP特異性和敏感性
第三章 豬巨細胞病毒環(huán)介導(dǎo)等溫擴增檢測方法在四川省豬巨細胞病毒的流行病學調(diào)查中的應(yīng)用
    1 主要材料、試劑與儀器
        1.1 實驗材料
        1.2 主要儀器
        1.3 主要溶液及配制
    2 試驗方法
        2.1 引物合成
        2.2 樣品DNA的抽取
        2.3 LAMP法擴增
        2.4 PCR擴增與結(jié)果判定
        2.5 PCMV gB基因部分序列的克隆
        2.6 序列分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 四川省PCMV抗原檢測結(jié)果
        3.2 不同臨床癥狀豬PCMV抗原檢測結(jié)果
        3.3 不同生長階段豬PCMV抗原檢測結(jié)果
        3.4 不同器官組織中PCMV抗原檢測結(jié)果
        3.5 生物信息學分析
    4 討論
第四章 四川省豬巨細胞病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、偽狂犬病毒與豬瘟病毒混合感染的流行病學調(diào)查
    1 主要材料、試劑與儀器
        1.1 主要材料
        1.2 試劑與儀器
        1.3 主要溶液及配制
    2 試驗方法
        2.1 病料DNA的抽取
        2.2 病料RNA的提取
        2.3 引物合成
        2.4 PCR/RT-PCR擴增
    3 結(jié)果
        3.1 PCMV、PRRSV、CSFV和PRV檢測結(jié)果
        3.2 PCMV、PRRSV、CSFV與PRV混合感染統(tǒng)計結(jié)果
    4. 討論
全文總結(jié)
參考文獻
致謝



本文編號：3928486