旨在探究不同糞菌液處理方法對其菌群活性及存活菌群物種組成的影響,為豬糞菌移植(FMT)的優(yōu)化應(yīng)用提供參考。本研究共設(shè)置7個試驗組制備糞菌液:靜置制備新鮮糞菌液組(FS)、靜置制備糞菌液于-80℃冷凍1周組(FFS)、離心制備新鮮糞菌液組(FC)、離心制備糞菌液于-80℃冷凍1周組(FFC)、液氮冷凍糞便24 h靜置制備糞菌液組(NS)、甘油+液氮冷凍糞便24 h靜置制備糞菌液組(GNS)和液氮冷凍糞便24 h靜置制備糞菌液于-80℃冷凍1周組(NFS),在37℃厭氧培養(yǎng)箱中平板培養(yǎng)48 h后,進(jìn)行菌落計數(shù)。從FS、 FFS、FC和FFC 4組中根據(jù)菌落形態(tài)隨機(jī)挑取87個單菌落純化后進(jìn)行16S rRNA基因全長測序。結(jié)果表明,靜置和離心兩種方法制備新鮮糞菌液時,糞菌活性存在顯著差異,離心組顯著低于靜置組(P<0.05)。但冷凍糞便使用靜置和離心兩種方法制備的菌懸液,其糞菌活性無顯著差異(P>0.05)。無論是靜置還是離心方法制備糞菌液,新鮮和冷凍兩種不同處理方式下的糞菌活性均無顯著差異(P>0.05),且對活菌的組成也無顯著影響。使用靜置法制備糞菌液時,FS、NS、GN...

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【部分圖文】：

圖1糞菌液稀釋梯度的制備及涂布

取“1.2”中所獲得的上層菌懸液于無菌生理鹽水中,依次稀釋為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6,如圖1所示,取10-4、10-5、10-6這3個稀釋梯度,進(jìn)行涂布,每個梯度2～3個重復(fù)。提前制備哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基(ELITE-MEDIA,艾禮生物科技有限....

圖2不同糞菌懸液處理方法對分離培養(yǎng)得到的菌落數(shù)目影響

采集新鮮糞便樣品后,有時并不能立即制備糞菌懸液并完成糞菌移植。試驗采用添加和不添加甘油兩種處理方式研究冷凍保存樣品對分離培養(yǎng)的菌落數(shù)量的影響。其一是采集新鮮糞便后,立即用液氮冷凍24h,然后采用靜置的方法制備糞菌懸液(NS組);其二將采集的新鮮糞便放入10%甘油中,混勻后隨即快....

圖3不同處理方式對糞菌懸液中存活菌群組成的影響

本研究還比較了新鮮糞菌懸液與-80℃超低溫冷凍保存1周懸液培養(yǎng)得到的菌落數(shù),在多次重復(fù)試驗中均發(fā)現(xiàn)糞菌活性無顯著差異,且在糞菌組成上也沒明顯差異,盡管存在少數(shù)菌的缺失,這與隨機(jī)挑選的菌株數(shù)目也有關(guān)系。在人類醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,雖然利用新鮮糞菌治療IBD的療效優(yōu)于冷凍糞菌[22],但也有研....

本文編號：3923407