豬瘟(classical swine fever, CSF)是豬的一種高度接觸性烈性傳染病,被認(rèn)為是嚴(yán)重危害和制約我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要傳染病。盡管我國早在1956年就研制出了世界上最有效的豬瘟兔化弱毒疫苗,成功控制了豬瘟在我國的大規(guī)模爆發(fā),但其一直沒有得到根除。近年來,豬瘟在我國的流行呈現(xiàn)非典型性、慢性、持續(xù)性感染和隱性感染等新特點,免疫豬群發(fā)生豬瘟的情況越來越多,這些對豬瘟的預(yù)防和控制提出了新的挑戰(zhàn)。 我國現(xiàn)階段主要采用ELISA方法對免疫豬群進(jìn)行抗體水平的監(jiān)測,該方法需要幾小時才能完成,且要求有熟練的實驗操作人員和特殊的儀器,不能滿足臨床實踐中對抗體水平監(jiān)測,快速、可靠、廉價的需求。因此,建立豬瘟病毒抗體的快速檢測方法具有非常重要的意義�，F(xiàn)有研究表明,豬瘟病毒的E2囊膜糖蛋白能刺激動物機體產(chǎn)生中和抗體,是CSFV最重要的保護(hù)性抗原,可用于建立豬瘟血清學(xué)檢測方法。 本研究利用原核表達(dá)的豬瘟E2融合蛋白,建立了檢測豬瘟病毒抗體的雙抗原夾心膠體金免疫層析方法,制備了快速檢測試紙條,取得了如下研究結(jié)果： 根據(jù)GenBank上發(fā)表的豬瘟病毒E2蛋白的基因序列,設(shè)計引物擴增去除信號肽和跨膜區(qū)的...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    1 概述
    2 豬瘟的流行和分布
    3 豬瘟病毒的病原學(xué)特性
        3.1 病原學(xué)
        3.2 豬瘟病毒的基因結(jié)構(gòu)
        3.3 豬瘟病毒的結(jié)構(gòu)蛋白及其功能
    4 實驗室四種常規(guī)診斷技術(shù)
        4.1 病毒分離鑒定
        4.2 熒光抗體法
        4.3 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)
        4.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗
    5 膠體金免疫層析技術(shù)
        5.1 膠體金免疫層析技術(shù)研究進(jìn)展
        5.2 膠體金的特性
        5.3 膠體金的制備
        5.4 免疫膠體金的制備、純化及保存
        5.5 膠體金免疫層析技術(shù)原理
        5.6 膠體金免疫層析技術(shù)在獸醫(yī)領(lǐng)域的應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗研究
    第一章 豬瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因在大腸桿菌的高效表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的純化制備
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 目的基因的擴增
            1.3 質(zhì)粒pET-32a(+)的提取及雙酶切
            1.4 原核表達(dá)載體pET-32a-E2的構(gòu)建
            1.5 重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)
            1.6 SDS-PAGE檢測表達(dá)產(chǎn)物
            1.7 目的蛋白的純化
            1.8 Western Blot檢測蛋白的免疫學(xué)活性
            1.9 兔抗E2蛋白多克隆抗體的制備和純化
        2 結(jié)果
            2.1 原核表達(dá)載體E2-pET32a的構(gòu)建
            2.2 SDS-PAGE檢測表達(dá)產(chǎn)物
            2.3 蛋白的純化與免疫學(xué)活性鑒定
            2.4 兔抗E2蛋白多克隆抗體的制備
        3 討論
    第二章 豬瘟抗體試紙條檢測方法的建立
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 膠體金的制備
            1.3 膠體金的質(zhì)量鑒定
            1.4 金標(biāo)抗原的制備
            1.5 試紙條各種條件的優(yōu)化
            1.6 豬瘟抗體免疫層析快速檢測試紙條的研制
            1.7 試紙條性能的測定
            1.8 臨床應(yīng)用試驗
        2 結(jié)果
            2.1 膠體金的制備及質(zhì)量鑒定
            2.2 膠體金最佳標(biāo)記條件的確定
            2.3 試紙條各種條件的優(yōu)化
            2.4 試紙條性能的測定
            2.5 臨床應(yīng)用試驗
        3 討論
            3.1 膠體金免疫層析法檢測模式的選擇
            3.2 影響膠體金制備的因素
            3.3 試紙條的性能
            3.4 膠體金免疫層析技術(shù)的優(yōu)勢
參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄
致謝



本文編號：3922238