牛肉脂肪含量是肉質(zhì)風味的重要指標,我國牛肉消費以含有一定量脂肪的紅肉為嗜好主流,因此急需培育出肉質(zhì)好、產(chǎn)量高的優(yōu)質(zhì)肉牛品種。轉(zhuǎn)基因技術(shù)是肉牛改良的重要手段之一,肌內(nèi)脂肪是影響肉質(zhì)的一個非常重要的因素,FABP4基因能影響肌內(nèi)脂肪含量,促進脂肪沉積。本研究對獲取的轉(zhuǎn)基因牛進行生物學評價,包括對轉(zhuǎn)基因陽性、基因拷貝數(shù)、基因表達水平、蛋白表達水平進行檢測,旨在為轉(zhuǎn)基因優(yōu)良新品種的進一步研究提供理論依據(jù)。本研究所得結(jié)果如下； 1、對通過真核表達載體的構(gòu)建、細胞轉(zhuǎn)染、體細胞核移植、胚胎移植等技術(shù)手段成功獲得的3頭克隆牛進行PCR檢測發(fā)現(xiàn)均為轉(zhuǎn)基因陽性；經(jīng)血液、尿液生化分析,表明轉(zhuǎn)基因個體身體狀況良好,脂肪代謝水平有所增強。 2、利用Southern blot方法檢測了3頭轉(zhuǎn)基因個體外源FABP4基因的拷貝數(shù),結(jié)果表明3頭轉(zhuǎn)基因牛的外源基因均為單拷貝插入。 3、對于整合位點及側(cè)翼序列的檢測,1號轉(zhuǎn)基因牛外源基因整合位點在13號染色體,側(cè)翼序列大小為736bp；2號個體外源基因整合位點在24號染色體,側(cè)翼序列大小為494bp；3號個體外源基因整合位點在10號染色體,側(cè)翼序列大小為771bp。 4、在...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 文獻綜述
    1.1 引言
    1.2 轉(zhuǎn)基因動物的研究進展
        1.2.1 轉(zhuǎn)基因動物的應(yīng)用
        1.2.2 轉(zhuǎn)基因動物的安全問題
    1.3 體細胞核移植技術(shù)的研究進展
        1.3.1 體細胞核移植技術(shù)與轉(zhuǎn)基因技術(shù)的結(jié)合
        1.3.2 影響體細胞核移植的因素
    1.4 FABP4基因功能及研究進展
        1.4.1 FABP4基因的生物學功能
        1.4.2 FABP4基因的研究進展
    1.5 研究的目的及意義
第二章 FABP4轉(zhuǎn)基因牛的陽性鑒定及生化指標檢測
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 樣品采集
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 試驗所需試劑配制
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
    2.2 試驗方法
        2.2.1 組織、血液總RNA的提取
        2.2.2 RT-PCR檢測
        2.2.3 血液生化分析
        2.2.4 尿液生化分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 個體陽性檢測
        2.3.2 轉(zhuǎn)基因個體身體成分檢測
    2.4 討論
        2.4.1 影響細胞轉(zhuǎn)染的因素
        2.4.2 綠色熒光蛋白在轉(zhuǎn)基因動物上的應(yīng)用
        2.4.3 轉(zhuǎn)基因動物安全性的分析
    2.5 小結(jié)
第三章 FABP4轉(zhuǎn)基因牛外源基因拷貝數(shù)及整合位點的測定
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 試驗所需試劑的配制
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 基因組DNA的提取
        3.2.2 Southern blot雜交
        3.2.3 TAIL-PCR檢測整合位點
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 Southern blot的鑒定結(jié)果
        3.3.2 整合位點檢測結(jié)果
    3.4 討論
        3.4.1 Southernblot技術(shù)的研究進展
        3.4.2 外源基因拷貝數(shù)對轉(zhuǎn)基因動物的影響
        3.4.3 TAIL-PCR技術(shù)的研究進展
        3.4.4 整合位點對轉(zhuǎn)基因動物的影響
    3.5 小結(jié)
第四章 轉(zhuǎn)基因牛FABP4基因及蛋白的表達水平檢測
    4.1 材料
        4.1.1 試驗動物及樣品采集
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 試驗所需試劑的配置
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 熒光定量PCR試驗
        4.2.2 Western blot檢測
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 轉(zhuǎn)基因牛與野生型牛外源FABP4基因的表達水平
        4.3.2 轉(zhuǎn)基因牛外源FABP4基因的相對表達水平變化
        4.3.3 轉(zhuǎn)基因與野生型牛內(nèi)源FABP4基因及整體FABP4基因表達水平變化
        4.3.4 轉(zhuǎn)基因牛FABP4基因的蛋白表達水平
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 全文結(jié)論
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3907573