洛克沙胂(Roxarsone,ROX)是有機(jī)砷制劑的一種,由于它具有抗球蟲,促進(jìn)生長等作用,被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖中。但隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,人們逐漸意識到了ROX帶來的不良影響,歐盟、美國、中國都相繼禁止ROX的使用或者規(guī)定了ROX的最低檢測限,因此必須建立ROX的快速檢測方法。目前檢測ROX最常用的方法仍是儀器檢測法,包括色譜法和質(zhì)譜法等,但這些方法需要昂貴的儀器設(shè)備,且需專業(yè)人員進(jìn)行操作;而免疫學(xué)快速檢測方法具有快速,特異,且能大批量檢測樣品的特點(diǎn),對ROX的現(xiàn)場快速篩查具有重要的意義。優(yōu)質(zhì)的抗體是建立免疫學(xué)快速檢測方法的關(guān)鍵,目前針對ROX的免疫學(xué)快速檢測方法主要是以多克隆抗體作為檢測抗體,尚未有ROX單克隆抗體檢測產(chǎn)品的相關(guān)報導(dǎo)。本研究旨在研制出高特異性、高靈敏度的抗體,為建立ROX免疫學(xué)快速檢測方法打下基礎(chǔ)。本研究以ROX的結(jié)構(gòu)類似物3-氨基-4-羥基苯胂酸(HAPA)作為ROX的替代物,用碳二亞胺(EDC)將BSA與HAPA通過酰胺鍵相連,制備人工合成抗原HAPA-BSA;用戊二醛將OVA與HAPA的伯氨基相連,制備用于檢驗(yàn)的包被抗原HAPA-OVA。用紫外掃描、SDS-PA...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖12HAI叭結(jié)構(gòu)式

的特征基團(tuán)，因此選擇偶聯(lián)方法時要盡量避免對砷酸基團(tuán)的破羥基是首選的活性基團(tuán)，但對苯環(huán)上羥基進(jìn)行改造的同時，可能的羥基基團(tuán)遭到破壞，最終導(dǎo)致ROX的特有結(jié)構(gòu)被破壞，使得完體后不能產(chǎn)生針對ROX的抗體。因此通過改造苯環(huán)上亞硝基，使就成為了一種行之有效的改造方案。半抗原的氨基與....

圖1.3HAPA-BSA合成示意圖

.4.2偶聯(lián)方法的選擇.4.2.1碳化二亞胺(EDC)法BSA、OVA上的常用活性基團(tuán)為氨基和羧基，EDC帶有N=C=N官能團(tuán)，基團(tuán)可以使氨基和羧基在一定條件下脫去一分子的水，從而生成酰胺鍵。將體蛋白BSA溶于PBS后，使其充分溶解，加入一定量的EDC活化....

圖1.4HAPA-OVA合成示意圖

.5完全抗原的鑒定合成的完全抗原需要進(jìn)行相應(yīng)的鑒定，以判斷半抗原是否與載體蛋白偶聯(lián)功。常用的鑒定方法有質(zhì)譜法，核磁共振法，SDS-PAGE鑒定分子量的方法及紫外掃描測定最大吸收峰的方法。其中前兩種鑒定方法準(zhǔn)確度高，但所需的儀器精密、昂貴。后兩種方法常用，且操作方法簡單，并且鑒....

圖2.1標(biāo)準(zhǔn)蛋白曲線

原濃度測定據(jù)進(jìn)行處理，以595nm處吸光值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出標(biāo)準(zhǔn)方程。將待測樣品的OD450nm濃度，并取其平均值，即為樣品的蛋白濃度，HA，同理測得HAPA-OVA的濃度為0.596mg/mL。1.1481.4361.7381.990g）00....

本文編號：3905132