牛病毒性腹瀉(亦稱粘膜病)是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(Office International desépizooties,OIE)必須上報(bào)的傳染病之一。其病原是牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)。BVDV為黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)的代表成員。BVDV能感染的動(dòng)物主要包括牛、羊和豬等,最近發(fā)現(xiàn)BVDV也能感染小鼠。但是其天然宿主為牛,尤其是幼齡牛的易感性最高。感染BVDV之后引起牛發(fā)病,產(chǎn)生的癥狀不一,有的急性感染,損傷牛的健康,重癥者死亡;有的持續(xù)感染,無(wú)明顯癥狀,卻成為主要的傳染源,并且由于免疫抑制作用,導(dǎo)致繼發(fā)其他疾病而放大其危害。目前在防控BVDV方面,歐美國(guó)家已經(jīng)積累了較豐富的經(jīng)驗(yàn),主要采用“篩查+淘汰”和“免疫+淘汰”兩種凈化策略。前者建立在有效的診斷基礎(chǔ)之上,且淘汰成本高;后者依賴高效的疫苗免疫,適用于養(yǎng)牛密度高,且BVDV流行率高的地區(qū)。因此,第二種策略較適應(yīng)我國(guó)當(dāng)前情況。要很好地控制在我國(guó)BVDV的流行,研究和生產(chǎn)高效疫苗成為當(dāng)務(wù)之急。BVDV的基因組約為12500核苷酸的正鏈RN...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1BVDV基因組結(jié)構(gòu)示意圖（未按正常比例）

圖1-1BVDV基因組結(jié)構(gòu)示意圖（未按正常比例）2.2BVDV-NS5B基因和功能BVDV基因組RNA編碼約3900個(gè)氨基酸。從ORF翻譯聚蛋白隨后通過(guò)病毒編碼或細(xì)胞蛋白酶加工成12種單個(gè)蛋白質(zhì)，其中NS5B位于多蛋白的羧基末端，含有經(jīng)典氨基酸基序....

圖2-1表位閾值與抗原表位特異性的關(guān)系

本實(shí)驗(yàn)中所使用的儀器設(shè)備見附錄1，所需的材料試劑見附錄2，所需的試劑配方見附錄3。2實(shí)驗(yàn)方法2.1NS5B基因抗原表位預(yù)測(cè)和設(shè)計(jì)從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中下載NS5B的序列，采用BepiPred和ABCpred聯(lián)合在線預(yù)測(cè)B細(xì)胞表位。其網(wǎng)站分別是http:....

圖2-3pET28a-NS5B重組質(zhì)粒圖譜

CAAATGGATACTGAAAAAAATACGCTTTCAGGGCAACCGGTGGTGGTGGCCGCAAAATAAAATATTATGAAACCGCGTGAAAAAGGCGGCGGCGGCGACACCCAGGTGACCAGTCGGCTACTATCGCAAAGAGTGGCACA....

圖2-4重組質(zhì)粒pET-28a-NS5B的鑒定結(jié)果

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文將重組質(zhì)粒pET-28a-NS5B進(jìn)行雙酶切處理，然后瓊脂糖凝膠電泳鑒定。結(jié)果顯S5B基因和pET-28a表達(dá)載體的條帶位置都正確354bp和5329bp（如圖2-4）。電泳之后經(jīng)過(guò)公司測(cè)序，結(jié)果完全正確。表明質(zhì)粒構(gòu)建成功，可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后....

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