牛病毒性腹瀉(亦稱粘膜病)是世界動物衛(wèi)生組織(Office International desépizooties,OIE)必須上報的傳染病之一。其病原是牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)。BVDV為黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)的代表成員。BVDV能感染的動物主要包括牛、羊和豬等,最近發(fā)現(xiàn)BVDV也能感染小鼠。但是其天然宿主為牛,尤其是幼齡牛的易感性最高。感染BVDV之后引起牛發(fā)病,產(chǎn)生的癥狀不一,有的急性感染,損傷牛的健康,重癥者死亡;有的持續(xù)感染,無明顯癥狀,卻成為主要的傳染源,并且由于免疫抑制作用,導(dǎo)致繼發(fā)其他疾病而放大其危害。目前在防控BVDV方面,歐美國家已經(jīng)積累了較豐富的經(jīng)驗,主要采用“篩查+淘汰”和“免疫+淘汰”兩種凈化策略。前者建立在有效的診斷基礎(chǔ)之上,且淘汰成本高;后者依賴高效的疫苗免疫,適用于養(yǎng)牛密度高,且BVDV流行率高的地區(qū)。因此,第二種策略較適應(yīng)我國當前情況。要很好地控制在我國BVDV的流行,研究和生產(chǎn)高效疫苗成為當務(wù)之急。BVDV的基因組約為12500核苷酸的正鏈RN...

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圖1-1BVDV基因組結(jié)構(gòu)示意圖（未按正常比例）

圖1-1BVDV基因組結(jié)構(gòu)示意圖（未按正常比例）2.2BVDV-NS5B基因和功能BVDV基因組RNA編碼約3900個氨基酸。從ORF翻譯聚蛋白隨后通過病毒編碼或細胞蛋白酶加工成12種單個蛋白質(zhì)，其中NS5B位于多蛋白的羧基末端，含有經(jīng)典氨基酸基序....

圖2-1表位閾值與抗原表位特異性的關(guān)系

本實驗中所使用的儀器設(shè)備見附錄1，所需的材料試劑見附錄2，所需的試劑配方見附錄3。2實驗方法2.1NS5B基因抗原表位預(yù)測和設(shè)計從NCBI數(shù)據(jù)庫中下載NS5B的序列，采用BepiPred和ABCpred聯(lián)合在線預(yù)測B細胞表位。其網(wǎng)站分別是http:....

圖2-3pET28a-NS5B重組質(zhì)粒圖譜

CAAATGGATACTGAAAAAAATACGCTTTCAGGGCAACCGGTGGTGGTGGCCGCAAAATAAAATATTATGAAACCGCGTGAAAAAGGCGGCGGCGGCGACACCCAGGTGACCAGTCGGCTACTATCGCAAAGAGTGGCACA....

圖2-4重組質(zhì)粒pET-28a-NS5B的鑒定結(jié)果

山東師范大學碩士學位論文將重組質(zhì)粒pET-28a-NS5B進行雙酶切處理，然后瓊脂糖凝膠電泳鑒定。結(jié)果顯S5B基因和pET-28a表達載體的條帶位置都正確354bp和5329bp（如圖2-4）。電泳之后經(jīng)過公司測序，結(jié)果完全正確。表明質(zhì)粒構(gòu)建成功，可以進行實驗后....

本文編號：3904607