發(fā)布時(shí)間：2024-02-15 23:32

　　鴨疫里氏桿菌(Riemerellaanatipestifer,RA)病是由鴨疫里氏桿菌引起家鴨、火雞、鵝和其它多種禽類的一種接觸性傳染病，又名稱鴨傳染性漿膜炎；感染鴨表現(xiàn)主要臨床癥狀是精神沉郁、共濟(jì)失調(diào)、角弓反張和淡綠色下痢等；病理變化主要有纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎、腦膜炎、結(jié)膜炎、關(guān)節(jié)炎和敗血癥等。該病的發(fā)病率和死亡率很高，血清型眾多，而各個(gè)血清型之間缺乏免疫保護(hù)，給該病的防治工作帶來(lái)困難，已對(duì)養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 從黑龍江、山東和廣東疑似RA感染的鴨場(chǎng)分離到4株細(xì)菌，經(jīng)菌落形態(tài)觀察、染色鏡檢、生化鑒定確定為RA，分別命名為HLG1、SD0901、SD0902和GD0901；利用平板凝集試驗(yàn)對(duì)RA進(jìn)行血清型鑒定，其中HLG1、SD0901和GD0901是血清1型菌株。藥敏試驗(yàn)表明，4株分離菌株對(duì)嗯諾沙星、氧氟沙星和先鋒霉素V相對(duì)敏感，但對(duì)卡那霉素和慶大霉素均耐藥。PCR擴(kuò)增了RA的外膜蛋白A(OmpA)基因，克隆測(cè)序結(jié)果顯示，4個(gè)RA分離株的ompA基因全長(zhǎng)均為1164bp，編碼387個(gè)氨基酸，在核苷酸水平上的同源性為89%¹00%...

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1.1 鴨疫里氏桿菌病的概述
        1.1.1 鴨疫里氏桿菌分類地位及命名
        1.1.2 鴨疫里氏桿菌的形態(tài)及生長(zhǎng)特性
        1.1.3 鴨疫里氏桿菌的理化特征
        1.1.4 鴨疫里氏桿菌的臨床癥狀及病理變化
        1.1.5 鴨疫里氏桿菌的流行病學(xué)特性
        1.1.6 鴨疫里氏桿菌的血清型研究
    1.2 鴨疫里氏桿菌毒力因子的研究
        1.2.1 溶血素
        1.2.2 外膜蛋白
        1.2.3 莢膜多糖
        1.2.4 脂多糖
        1.2.5 粘附素
        1.2.6 熱休克蛋白
    1.3 鴨疫里氏桿菌診斷技術(shù)
        1.3.1 涂片鏡檢
        1.3.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)
        1.3.3 瓊脂擴(kuò)散沉淀試驗(yàn)
        1.3.4 間接血凝試驗(yàn)
        1.3.5 聚合酶鏈反應(yīng)
        1.3.6 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
        1.3.7 熒光抗體技術(shù)
        1.3.8 間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
    1.4 鴨疫里氏桿菌防治及其疫苗研究
        1.4.1 藥物防治
        1.4.2 疫苗的預(yù)防
    1.5 乳膠凝集試驗(yàn)的研究進(jìn)展
        1.5.1 乳膠凝集試驗(yàn)的原理
        1.5.2 乳膠凝集試驗(yàn)的研究現(xiàn)狀
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 鴨疫里氏桿菌的分離鑒定及其對(duì)SPF鴨的致病性研究
    2.1 材料和方法
        2.1.1 菌株、血清和質(zhì)粒
        2.1.2 病料來(lái)源和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 細(xì)菌分離和生化鑒定
        2.1.6 血清型的鑒定
        2.1.7 細(xì)菌藥敏試驗(yàn)
        2.1.8 OmpA基因的引物設(shè)計(jì)與合成
        2.1.9 基因組DNA的制備
        2.1.10 OmpA基因的PCR擴(kuò)增
        2.1.11 PCR產(chǎn)物的回收與純化
        2.1.12 感受態(tài)細(xì)胞的制備（氯化鈣法）
        2.1.13 純化產(chǎn)物OmpA的連接與轉(zhuǎn)化
        2.1.14 提取重組質(zhì)粒OmpA
        2.1.15 重組質(zhì)粒的酶切鑒定和序列分析
        2.1.16 HLG1分離株對(duì)SPF鴨的致病性試驗(yàn)
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 細(xì)菌的分離與鑒定結(jié)果
        2.2.2 生化鑒定結(jié)果
        2.2.3 血清型的鑒定結(jié)果
        2.2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.5 OmpA基因PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.2.6 重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
        2.2.7 OmpA基因序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果
        2.2.8 HLG1分離株對(duì)SPF鴨的致病性試驗(yàn)結(jié)果
    2.3 討論
第三章 鴨疫里氏桿菌主要蛋白的克隆、表達(dá)和抗原性分析
    3.1 材料和方法
        3.1.1 菌株和質(zhì)粒
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.5 主要試劑的配方
        3.1.6 引物設(shè)計(jì)與合成
        3.1.7 PCR擴(kuò)增Riean-0791、Riean-1110和Riean-1852基因
        3.1.8 PCR產(chǎn)物的回收與純化
        3.1.9 連接與轉(zhuǎn)化
        3.1.10 重組質(zhì)粒與測(cè)序分析
        3.1.11 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其酶切鑒定
        3.1.12 重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)與SDS-PAGE分析
        3.1.13 包涵體蛋白的純化
        3.1.14 表達(dá)產(chǎn)物的Westernblot分析
        3.1.15 免疫接種及攻毒保護(hù)試驗(yàn)
        3.1.16 免疫鴨血清的抗體效價(jià)的測(cè)定
        3.1.17 細(xì)菌膜蛋白的提取方法
        3.1.18 細(xì)菌膜蛋白的SDS-PAGE電泳與Westernblot鑒定
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 Riean-0791基因的克隆、表達(dá)及鑒定結(jié)果
        3.2.2 Riean-1110基因的克隆、表達(dá)及鑒定結(jié)果
        3.2.3 Riean1852基因的克隆、表達(dá)及鑒定結(jié)果
        3.2.4 RA-HLG1菌液對(duì)免疫鴨的攻毒免疫保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果
        3.2.5 免疫鴨血清抗體效價(jià)的檢測(cè)結(jié)果
        3.2.6 RA-HLG1株細(xì)菌外膜蛋白的提取結(jié)果
        3.2.7 Riean0791、Riean1110和Riean1852蛋白在細(xì)菌中的定位結(jié)果
    3.3 討論
第四章 乳膠凝集試驗(yàn)方法(LAT)的建立及其應(yīng)用
    4.1 材料和方法
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 乳膠凝集相關(guān)緩沖液的配制
        4.1.3 蛋白的復(fù)性
        4.1.4 羧化乳膠的致敏方法
        4.1.5 最佳偶聯(lián)蛋白量的選擇
        4.1.6 最佳偶聯(lián)時(shí)間的選擇
        4.1.7 最佳羧化乳膠濃度的選擇
        4.1.8 乳膠封閉劑的選擇
        4.1.9 偶聯(lián)反應(yīng)終止劑的選擇
        4.1.10 乳膠凝集試驗(yàn)檢測(cè)操作及其結(jié)果的判定
        4.1.11 特異性和敏感性試驗(yàn)
        4.1.12 乳膠凝集試驗(yàn)的重復(fù)性試驗(yàn)
        4.1.13 乳膠抗原的保存期試驗(yàn)
        4.1.14 乳膠抗原自凝性檢測(cè)
        4.1.15 乳膠凝集試驗(yàn)和間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)符合率試驗(yàn)
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 最佳偶聯(lián)Riean0791蛋白量的確定
        4.2.2 最佳偶聯(lián)時(shí)間的確定
        4.2.3 最佳羧化乳膠濃度的選擇
        4.2.4 封閉劑的選擇
        4.2.5 特異性試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.6 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.7 偶聯(lián)反應(yīng)終止劑的選擇
        4.2.8 批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.9 批間重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.10 乳膠抗原保存期檢測(cè)結(jié)果
        4.2.11 乳膠抗原自凝性檢測(cè)結(jié)果
        4.2.12 乳膠凝集試驗(yàn)（LAT）與間接ELISA的符合率試驗(yàn)結(jié)果
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷
附錄



本文編號(hào)：3900427