蝙蝠是世界上僅次于嚙齒類的第二大類哺乳動物，其分布于除兩極以外的地方，同時也是許多病毒的自然宿主。我國云南省地處西南邊陲，與緬甸、老撾、越南等東南亞國家接壤，戰(zhàn)略意義突出。該地區(qū)是多種疾病的疫源地，研究發(fā)現(xiàn)該地區(qū)蝙蝠攜帶有多種人獸共患病毒，如尼帕病毒(Nipah virus)、乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus)、狂犬病毒(Rabiesvirus)、圓環(huán)病毒(Circovirus)等。為了有效地監(jiān)控云南省及周邊地區(qū)新發(fā)傳染病(emerging infectious diseases, EID)，防止野生動物(特別是蝙蝠)疫病，跨種和跨境傳播給其它動物甚至是人類，保障邊境地區(qū)人民生命安全，徹底調(diào)查該地區(qū)蝙蝠病毒生態(tài)學(xué)具有重要的意義。而基于第二代高通量測序(High-throughputsequencing)的病毒宏基因組學(xué)(Viral metagenomics, ViralMeta)則為調(diào)查已知和未知病毒提供了高效的工具。 本研究于2008年到2011年間，共收集到1,219份外表健康蝙蝠樣品，收集地點...

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
倫理證明
摘要
Abstract
前言
實驗設(shè)計
第一章 蝙蝠病毒宏基因組學(xué)研究
    1.1 材料
        1.1.1 蝙蝠樣品采集
        1.1.2 主要試劑與耗材
        1.1.3 實驗儀器
        1.1.4 生物信息學(xué)軟件
    1.2 方法
        1.2.1 蝙蝠種類鑒定及解剖
        1.2.2 蝙蝠樣品研磨
        1.2.3 蝙蝠樣品病毒宏基因組學(xué)前期處理
        1.2.4 蝙蝠樣品 RNA 提取
        1.2.5 ViralMeta 反轉(zhuǎn)錄及 SISPA 擴增
        1.2.6 病毒宏基因組學(xué)測序
        1.2.7 特定病毒 PCR/RT-PCR 檢測
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 蝙蝠樣品采集結(jié)果
        1.3.2 核酸 SISPA 擴增結(jié)果
        1.3.3 病毒宏基因組學(xué)測序結(jié)果
        1.3.4 腺病毒檢測結(jié)果
        1.3.5 正嗜肝病毒檢測結(jié)果
        1.3.6 星狀病毒檢測結(jié)果
        1.3.7 冠狀病毒檢測結(jié)果
        1.3.8 輪狀病毒檢測結(jié)果
        1.3.9 軟腐病毒檢測結(jié)果
    1.4 討論
第二章 新型蝙蝠病毒的鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 蝙蝠樣品
        2.1.2 主要試劑與耗材
        2.1.3 細(xì)胞系與實驗動物
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 生物信息學(xué)軟件
    2.2 方法
        2.2.1 引物設(shè)計
        2.2.2 核酸提取
        2.2.3 全基因擴增及測序
        2.2.4 冠狀病毒 S1 結(jié)構(gòu)域表達(dá)及 Western Blot 分析
        2.2.5 病毒分離
        2.2.6 輪狀病毒 TCID50測定
        2.2.7 病毒粒子電鏡觀察
        2.2.8 病毒核酸電泳
        2.2.9 輪狀病毒動物試驗
        2.2.10 生物信息分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 蝙蝠肝炎病毒(Bat hepatitis virus, BtHV)鑒定結(jié)果
        2.3.2 蝙蝠 SARS 樣冠狀病毒鑒定結(jié)果
        2.3.3 蝙蝠輪狀病毒鑒定結(jié)果
    2.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    溶液配制
    附表
文獻(xiàn)綜述——蝙蝠與蝙蝠病毒
    參考文獻(xiàn)
代表性論著
個人簡介
導(dǎo)師簡介
致謝



本文編號：3895713