以體外培養(yǎng)SD大鼠乳鼠顱骨成骨細胞(OB)為研究對象,傳代培養(yǎng)至第3代,經(jīng)鑒定后,在培養(yǎng)體系中分別添加終濃度為0 mg/m L(對照組)、0.063 mg/m L(低劑量組)、0.126mg/mL(中劑量組)、0.252 mg/mL(高劑量組)三氯化鋁(Al Cl3·6H2O),染鋁24 h。采用實時熒光定量PCR檢測OB內(nèi)BMP-2、BMPR-ⅠA、BMPR-Ⅱ、Runx2、Osterix、COL-I、ALP和BGP m RNA表達水平,Western blot檢測OB細胞內(nèi)BMP-2和p-Smad1/5/8、細胞膜上p BMPR-ⅠA及細胞核內(nèi)Runx2和Osterix蛋白表達水平,免疫共沉淀方法檢測OB細胞質(zhì)及細胞核內(nèi)Smad1/5/8/4復(fù)合物蛋白表達水平。旨在研究鋁抑制OB功能的BMP/Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制,結(jié)果表明:(1)染鋁組OB細胞內(nèi)BMP-2 m RNA及蛋白表達水平和p-Smad1/5/8蛋白表達水平、BMPR-A和BMPR-m RNA表達水平、細胞膜上p BMPR-A蛋白表達水平及細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)Smad1/5/8/4復(fù)合物蛋白表達水平顯著低于CG(p<0....

【文章頁數(shù)】：38 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 鋁對成骨細胞功能的影響
    1.2 BMP/Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與成骨細胞
    1.3 細胞核轉(zhuǎn)錄因子與成骨細胞
        1.3.1 Runx2與OB
        1.3.2 Osterix與OB
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗主要儀器與試劑
        2.1.1 實驗主要儀器
        2.1.2 主要試劑
    2.2 大鼠顱骨OB的培養(yǎng)及處理
        2.2.1 顱骨OB提取
        2.2.2 OB傳代培養(yǎng)及處理
        2.2.3 樣品采集
    2.3 檢測項目與方法
        2.3.1 OB內(nèi)BMP-2、BMPR、Runx-2、Osterix、Col、ALP、BGP檢測
        2.3.3 OB 內(nèi)蛋白表達的檢測
    2.4 實驗數(shù)據(jù)的分析及統(tǒng)計
3 實驗結(jié)果
    3.1 AlCl₃對 OB 質(zhì) BMP-2、BMPR-ⅠA、BMPR-Ⅱm RNA 的影響
    3.2 AlCl₃對OB質(zhì)內(nèi)Runx-2、Osterix m RNA表達的影響
    3.3 AlCl₃對OB細胞內(nèi)Col、ALP和BGP m RNA表達的影響
    3.4 AlCl₃對OB細胞內(nèi)BMP-2 蛋白表達的影響
    3.5 AlCl₃對OB細胞膜p BMPR-A蛋白表達的影響
    3.6 AlCl₃對OB細胞內(nèi)p-Smad1/5/8 的影響
    3.7 AlCl₃對OB細胞質(zhì)及細胞核內(nèi)Smad1/5/8/4 復(fù)合物的影響
    3.8 AlCl₃對OB細胞核內(nèi)Runx2和Osterix蛋白表達的影響
4 討論
    4.1 AlCl₃對OB中BMP/Smad信號通路的影響
        4.1.1 AlCl₃對OB中BMP-2 影響
        4.1.2 AlCl₃對OB中BMPR型的影響
        4.1.3 AlCl₃對OB內(nèi)p-Smad1/5/8 和OB細胞質(zhì)及細胞核中Smad1/5/8/4 的影響
    4.2 AlCl₃對 OB 細胞核轉(zhuǎn)錄因子 Runx-2 和 Osterix 的影響
    4.3 AlCl₃對OB中COL、ALP、BGP mRNA的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3890082