胸膜肺炎放線桿菌是引起豬傳染性胸膜肺炎的病原菌。為了弄清豬傳染性胸膜肺炎在四川省的流行情況,本研究對已經(jīng)建立的間接ELISA檢測APP抗體方法進(jìn)行了改進(jìn)和優(yōu)化,并通過所建立的方法對四川部分地區(qū)進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查。1、間接ELISA方法檢測APP抗體的改進(jìn)首先,試驗制備了豬抗APP標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。先培養(yǎng)APP5型菌并用甲醛滅活,制備成含量為1×1010CFU/ml的抗原,對血清中APP抗體為陰性的一月齡斷奶豬進(jìn)行肌肉注射,每兩周進(jìn)行一次,每次2ml,共免疫注射3次；一周以后再通過以APP血清5型活菌耳靜脈注射2ml (1×1010CFU/ml)進(jìn)行加強(qiáng)免疫,之后收集血清進(jìn)行瓊擴(kuò)檢測效價為1：8。隨后,改進(jìn)和優(yōu)化了間接ELISA檢測豬APP抗體方法。采用方陣滴定法確定了APP抗原的最佳包被濃度為1:100 (18.5ug/ml);血清最佳稀釋倍數(shù)為1：160。通過梯度篩選出兔抗豬IgG-HRP酶標(biāo)二抗的最佳工作濃度為1：5000。最后,通過與IHA檢測方法的比較表明該方法與IHA檢測結(jié)果相符且敏感性大大高于IHA試劑盒。對豬大腸桿菌、鏈球菌、多殺性巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌和乙型腦炎等陽性血清的檢...

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬傳染性胸膜肺炎的病原學(xué)
    1.2 豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的發(fā)現(xiàn)及流行現(xiàn)狀
    1.3 豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的傳染途徑
    1.4 豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的血清型
    1.5 豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的特征
    1.6 診斷方法
        1.6.1 血清學(xué)診斷方法
        1.6.2 分子生物學(xué)技術(shù)
研究目的
第二章 豬胸膜肺炎放線桿菌抗體間接ELISA檢測方法的改進(jìn)
    2.1 材料
        2.1.1 菌種和相關(guān)試劑
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 ELISA相關(guān)試劑和溶液
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 試劑盒
        2.1.6 實(shí)驗動物
    2.2 方法
        2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)陰、陽性血清的制備
        2.2.2 ELISA抗原的制備
        2.2.3 間接ELISA方法的建立
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 不同時期的血清效價測定
        2.3.2 超聲波破碎抗原的濃度測定
        2.3.3 抗原最佳包被濃度和血清最佳稀釋度的確定
        2.3.4 酶標(biāo)二抗最佳稀釋度的確定
        2.3.5 間接ELISA結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
        2.3.6 特異性試驗
        2.3.7 敏感性和符合率試驗
    2.4 討論
        2.4.1 陽性血清的制備
        2.4.2 對間接ELISA方法的改進(jìn)
    2.5 結(jié)論
第三章 四川部分地區(qū)豬傳染性胸膜肺炎的血清學(xué)調(diào)查
    3.1 材料
        3.1.1 試劑
        3.1.2 儀器
    3.2 方法
        3.2.1 血清樣品的采集
        3.2.2 間接ELISA操作步驟
        3.2.3 四川地區(qū)APP抗體陽性檢出率的分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 血清的收集
        3.3.2 豬不同生產(chǎn)階段胸膜肺炎放線桿菌感染情況
        3.3.3 不同地區(qū)胸膜肺炎放線桿菌血清抗體檢出情況
        3.3.4 不同飼養(yǎng)模式下豬胸膜肺炎放線桿菌感染情況
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號：3880908