日本乙型腦炎(Japanese Encephalitis,JE)是由日本乙型腦炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的一種人畜共患病,簡稱乙腦。JEV是黃病毒屬的成員之一,主要通過庫蚊傳播。雖然JEV疫苗已廣泛使用,但迄今,其傳播范圍仍然在不斷擴(kuò)大。為了研究JEV的致病機(jī)理并為日本乙型腦炎提供更好的治療方法,本研究以DC-SIGN(Dendritic Cell-Specific Intercellular adhesion molecule-3-Grabbing Non-integrin,DC-SIGN)家族為切入點(diǎn),以小鼠為感染模型,探究在JEV感染后DC-SIGN發(fā)揮的免疫功能。基于前期RNA測序結(jié)果,我們利用JEV P3強(qiáng)毒株和SA14-14-2疫苗株感染小鼠第3天的脾臟樣品,對DC-SIGN家族中表達(dá)有變化的3個(gè)成員DC-SIGN(CD209A)、DC-SIGNR1(CD209B)和DC-SIGNR2(CD209C)進(jìn)行了驗(yàn)證。相對于對照組小鼠,CD209A在P3感染小鼠脾臟中的CD11c⁺樹突狀細(xì)胞、F4-80

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表(Abbreviation)
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 日本乙型腦炎簡介
    1.2 日本乙型腦炎的發(fā)現(xiàn)
    1.3 日本乙型腦炎的流行病學(xué)
        1.3.1 日本乙型腦炎的流行與分布
        1.3.2 日本乙型腦炎的傳播
    1.4 日本乙型腦炎的病原學(xué)特征
        1.4.1 日本乙型腦炎病毒的分子結(jié)構(gòu)
        1.4.2 日本乙型腦炎病毒的復(fù)制
        1.4.3 日本乙型腦炎病毒的致病過程
    1.5 日本乙型腦炎的臨床癥狀及診斷
    1.6 日本乙型腦炎的防控及疫苗的研究進(jìn)展
    1.7 日本乙型腦炎病毒感染引起的免疫應(yīng)答
        1.7.1 先天性免疫應(yīng)答
        1.7.2 適應(yīng)性免疫應(yīng)答
    1.8 樹突狀細(xì)胞在日本乙型腦炎病毒感染中的功能
        1.8.1 不同DCs亞群在日本乙型腦炎病毒感染中的功能
        1.8.2 DCs對日本乙型腦炎病毒的攝取、處理和提呈
        1.8.3 DCs培養(yǎng)及細(xì)胞系
    1.9 DC-SIGN分子在黃病毒感染中的功能
        1.9.1 DC-SIGN分子的發(fā)現(xiàn)
        1.9.2 DC-SIGN分子的表達(dá)及配體
        1.9.3 DC-SIGN分子在黃病毒感染中的功能
        1.9.4 DC-SIGN分子家族
2 目的與意義
3 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 病毒、質(zhì)粒、菌株、細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要藥品和試劑
        3.1.3 培養(yǎng)基及其配制
        3.1.4 溶液及其配制
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)所用手術(shù)器械
        3.1.6 重要儀器及設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)
        3.2.2 JEV的擴(kuò)增與毒價(jià)滴定
        3.2.3 JEV-P3和SA14-14-2感染C57BL/6小鼠
        3.2.4 小鼠脾臟單細(xì)胞懸液的制備
        3.2.5 細(xì)胞表面染色
        3.2.6 RNA的提取與DNA的去除
        3.2.7 反轉(zhuǎn)錄PCR
        3.2.8 熒光定量PCR
        3.2.9 BMDCs細(xì)胞的制備
        3.2.10常規(guī)分子克隆實(shí)驗(yàn)
        3.2.11 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞的方法
        3.2.12 構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)DC2.4細(xì)胞系
        3.2.13 相關(guān)引物的設(shè)計(jì)與合成
        3.2.14體外細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
        3.2.15 熒光定量PCR檢測JEV拷貝數(shù)
        3.2.16 流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)分析
        3.2.17 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        3.2.18 手術(shù)器械消毒
        3.2.19 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理聲明
        3.2.20 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及廢物無害化處理
4 結(jié)果與分析
    4.1 JEV-P3株和SA14-14-2株毒價(jià)的測定
    4.2 JEV感染對DC-SIGN分子家族表達(dá)的影響
        4.2.1 JEV感染對DC-SIGN分子家族表達(dá)的影響
        4.2.2 JEV感染對CD209A分子表達(dá)的影響
        4.2.3 JEV感染對CD209B分子表達(dá)的影響
        4.2.4 JEV感染對CD209C分子表達(dá)的影響
    4.3 CD209A、CD209B在小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞上的表達(dá)
        4.3.1 小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.3.2 CD209A和CD209B在小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞上的表達(dá)
    4.4 穩(wěn)定表達(dá)CD209A、CD209B的DC2.4細(xì)胞系的構(gòu)建及鑒定
        4.4.1 穩(wěn)定表達(dá)CD209A的DC2.4細(xì)胞系的構(gòu)建及鑒定
        4.4.2 穩(wěn)定表達(dá)CD209B的DC2.4細(xì)胞系的構(gòu)建及鑒定
    4.5 CD209A、CD209B對JEV感染的影響
    4.6 CD209A、CD209B對T細(xì)胞增殖的影響
        4.6.1 JEV感染對EL-4細(xì)胞增殖的影響
        4.6.2 CD209A對EL-4細(xì)胞增殖的影響
        4.6.3 CD209B對EL-4細(xì)胞增殖的影響
5 討論
    5.1 JEV感染抑制CD209A的表達(dá)
    5.2 JEV感染促進(jìn)CD209B的表達(dá)
    5.3 樹突狀細(xì)胞成熟狀態(tài)與CD209A、CD209B表達(dá)的關(guān)系
    5.4 CD209A促進(jìn)JEV的復(fù)制
    5.5 CD209A、CD209B促進(jìn)T細(xì)胞的增殖
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3873189