目前,卵母細胞體外成熟培養(yǎng)技術已取得很大進展,但體外成熟得到的卵母細胞仍存在發(fā)育能力較差的問題。本研究旨在探討血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)對水牛卵母細胞體外成熟及其后續(xù)胚胎發(fā)育的影響,并初步研究其相關作用機制,以期進一步完善水牛體外成熟培養(yǎng)體系,提高體外胚胎生產(chǎn)效率。 首先,初步探討了VEGF及其受體VEGFR1與VEGFR2在卵泡發(fā)育和卵丘卵母細胞復合物(COCs)體外成熟培養(yǎng)過程中的表達變化規(guī)律。VEGF在卵巢組織表達的免疫組織化學檢測結果發(fā)現(xiàn),不同時期卵泡中均有VEGF表達,且主要在顆粒細胞中表達。水牛COCs中VEGF表達情況的免疫熒光染色檢測結果顯示,VEGF主要在卵丘細胞中表達,在卵母細胞不表達。水牛COCs在體外成熟過程中的VEGF及其受體表達變化實時熒光定量PCR (Q-PCR)檢測結果發(fā)現(xiàn),VEGF在成熟培養(yǎng)過程中(0h、6h、12h與24h)的表達呈下降趨勢,其中VEGF在成熟前(0h)表達量顯著高于成熟6h(P<0.05),而成熟6h、12h與24h間VEGF表達量差異不顯著(P>0.05)；VEGFR1與VEGFR2在成熟過程中均呈現(xiàn)出先升后降的趨勢...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文獻綜述
    1 卵母細胞體外成熟
        1.1 卵母細胞的發(fā)生
        1.2 卵母細胞減數(shù)分裂恢復調(diào)控
        1.3 卵母細胞體外成熟培養(yǎng)及其影響因素
        1.4 顆粒細胞對卵母細胞發(fā)育的影響
    2 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)
        2.1 VEGF的分子結構
        2.2 VEGF的信號通路與生物學功能
        2.3 VEGF在卵巢發(fā)育中表達情況及其功能
        2.4 VEGF對卵母細胞成熟的影響
    3 研究目的與意義
第二部分 試驗部分
    第一章 內(nèi)源性VEGF在卵泡和COCs中的表達規(guī)律的初步研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 統(tǒng)計分析
        2 結果與分析
            2.1 免疫組化檢測卵泡發(fā)育過程中VEGF的表達情況
            2.2 水牛卵丘卵母細胞復合物VEGF免疫熒光染色
            2.3 卵母細胞體外成熟過程中VEGF及其受體mRNA的表達情況
        3 討論
        4 結論
    第二章 VEGF對水牛卵母細胞體外成熟培養(yǎng)效果的影響及其作用機制的研究
        1 材料與方法
            1.1 實驗材料
            1.2 主要儀器設備及試劑
            1.3 試驗方法
            1.4 試驗設計
            1.5 統(tǒng)計分析
        2 結果與分析
            2.1 VEGF對水牛卵母細胞體外成熟效果的影響
            2.2 VEGF對水牛卵母細胞IVF早期胚胎發(fā)育的影響
            2.3 VEGF對水牛卵母細胞SCNT早期胚胎發(fā)育的影響
            2.4 VEGF對水牛裸卵體外成熟培養(yǎng)的影響
            2.5 VEGF對卵丘細胞凋亡的影響
            2.6 VEGF對凋亡相關基因表達的影響
            2.7 VEGF對卵丘細胞發(fā)育相關基因表達的影響
        3 討論
        4 結論
參考文獻
附錄1
附表2 英文中文對照表
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表學術論文



本文編號：3865046