旨在建立一種可視化多重?zé)晒釸T-LAMP方法用于檢測(cè)小反芻獸疫病毒和藍(lán)舌病病毒的核酸,并初步應(yīng)用于小反芻獸疫和藍(lán)舌病臨床樣品的檢測(cè)。比對(duì)GenBank中小反芻獸疫N基因和藍(lán)舌病NS3基因保守區(qū)域,設(shè)計(jì)2套LAMP引物,在每條內(nèi)引物FIP的5′端標(biāo)記熒光基團(tuán)。對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化,驗(yàn)證方法的特異性、靈敏度和干擾性,同時(shí)應(yīng)用該方法檢測(cè)168份臨床樣品。結(jié)果表明,該方法對(duì)小反芻獸疫病毒和藍(lán)舌病病毒高度特異,與口蹄疫病毒、鹿流行性出血熱病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反芻動(dòng)物病毒均無(wú)交叉反應(yīng),檢測(cè)靈敏度為200 copies/μL,干擾性小,可同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)不同濃度的模板。對(duì)168份樣品的檢測(cè)結(jié)果顯示,小反芻獸疫病毒的感染率為3.6%,藍(lán)舌病病毒的感染率為13.1%,無(wú)兩種病毒混合感染;與熒光RT-PCR方法相比,此多重?zé)晒釸T-LAMP方法敏感性為91.7%～100%,特異性為100%。表明建立的多重?zé)晒釸T-LAMP可快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)小反芻獸疫病毒和藍(lán)舌病病毒,具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 毒株來(lái)源
        1.1.2 主要試劑及儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)
        1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        1.2.3 多重?zé)晒釸T-LAMP反應(yīng)
            (1)核酸抽提
            (2)RT-LAMP反應(yīng)
        1.2.4 干擾性試驗(yàn)
        1.2.5 臨床樣品的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 特異性試驗(yàn)結(jié)果
    2.2 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
    2.3 干擾性試驗(yàn)結(jié)果
    2.4 臨床樣品的檢測(cè)
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