機(jī)體黏膜生態(tài)系統(tǒng)主要由黏膜和其表面的微生態(tài)系統(tǒng)構(gòu)成,是抵抗外界病原微生物入侵的第一道防線。pIgR和FcRn是黏膜生態(tài)系統(tǒng)中參與黏膜免疫應(yīng)答的重要效應(yīng)分子,能夠轉(zhuǎn)運(yùn)相應(yīng)抗體到黏膜表面,并能中和清除病原,以維持黏膜生態(tài)系統(tǒng)中正常的微生物菌群和生理環(huán)境。呼吸道、消化道和泌尿生殖道等器官的多種細(xì)胞能夠合成pIgR和FcRn,并在特定部位參與黏膜免疫應(yīng)答。扁桃體(包括腭扁桃體、咽扁桃體、舌扁桃體、軟腭扁桃體、會(huì)厭扁桃體、咽鼓管扁桃體)在不同動(dòng)物呼吸道中的存在情況不同,并且作為重要的黏膜相關(guān)淋巴組織(Mucosa-associated lymphoid tissues,MALT)在呼吸道黏膜免疫和整個(gè)黏膜免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用。以上6種扁桃體在雙峰駝中均存在。為了確定pIgR和FcRn在雙峰駝各扁桃體中的表達(dá)和分布特點(diǎn)以及兩種受體在局部黏膜免疫中的生物學(xué)功能,同時(shí)為進(jìn)一步探究?jī)煞N受體在雙峰駝和其他動(dòng)物體內(nèi)的生物學(xué)功能有無物種間差異。本文以6峰健康成年(6¹6歲)阿拉善雙峰駝為研究對(duì)象,借助生物信息學(xué)分析對(duì)雙峰駝pIgR和FcRnα鏈的相關(guān)生物信息學(xué)特性加以分析;克隆得到...

【文章頁數(shù)】：145 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
SUMMARY
英文縮略詞表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 黏膜免疫系統(tǒng)概述
        1 黏膜免疫系統(tǒng)的構(gòu)成形式
        2 黏膜免疫系統(tǒng)的作用機(jī)制
            2.1 黏膜免疫系統(tǒng)的抗原攝取和抗原遞呈
            2.2 黏膜免疫系統(tǒng)的免疫應(yīng)答機(jī)制
        3 黏膜免疫耐受機(jī)制
    第二章 pIgR和FcRn在黏膜免疫系統(tǒng)中的作用
        1 pIgR和FcRn概述
        2 pIgR的生物學(xué)特性
            2.1 pIgR的組成結(jié)構(gòu)
            2.2 PIGR基因的定位和結(jié)構(gòu)
            2.3 pIgR的主要功能
            2.4 pIgR的組織表達(dá)特點(diǎn)
            2.5 pIgR的表達(dá)調(diào)控
        3 FcRn的生物學(xué)特性
            3.1 FcRn的組成結(jié)構(gòu)
            3.2 FCGRT基因的結(jié)構(gòu)與定位
            3.3 FcRn的主要功能
            3.4 FcRn的組織表達(dá)特點(diǎn)
            3.5 FcRn的表達(dá)調(diào)控
    第三章 扁桃體的構(gòu)成和功能
        1 扁桃體的種類
            1.1 腭扁桃體
            1.2 舌扁桃體
            1.3 咽扁桃體
            1.4 軟腭扁桃體
            1.5 會(huì)厭扁桃體
            1.6 咽鼓管扁桃體
        2 扁桃體對(duì)機(jī)體的重要保護(hù)作用
        3 雙峰駝在免疫方面的特殊性及其扁桃體相關(guān)研究
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    第一章 雙峰駝FCGRT和PIGR的基因克隆及相關(guān)生物信息學(xué)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要儀器設(shè)備
                1.1.2 主要試劑
                1.1.3 引物合成
            1.2 方法
                1.2.1 總RNA的提取
                1.2.2 去除基因組DNA
                1.2.3 合成c DNA第一鏈
                1.2.4 擴(kuò)增及基因片段的回收
                1.2.5 回收片段加A并回收
                1.2.6 連接p MD18-T
                1.2.7 DH5a感受態(tài)細(xì)胞的制備
                1.2.8 轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
                1.2.9 陽性克隆的鑒定和測(cè)序
            1.3 生物信息學(xué)分析
                1.3.1 理化性質(zhì)
                1.3.2 亞細(xì)胞定位分析
                1.3.3 跨膜情況預(yù)測(cè)
                1.3.4 信號(hào)肽預(yù)測(cè)
                1.3.5 磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)
                1.3.6 一級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
                1.3.7 二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
                1.3.8 三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
                1.3.9 序列同源性分析
                1.3.10 進(jìn)化分析
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 總RNA的抽提
            2.2 目的基因的PCR擴(kuò)增
            2.3 重組質(zhì)粒的菌液PCR鑒定
            2.4 克隆所得雙峰駝FcRn α 鏈和pIgR CDS區(qū)的序列信息
                2.4.1 FCGRT α 鏈CDS區(qū)序列
                2.4.2 PIGR CDS區(qū)序列
            2.5 雙峰駝FcRnα鏈和pIgR的理化性質(zhì)與亞細(xì)胞定位分析
            2.6 雙峰駝FcRnα鏈和pIgR跨膜情況預(yù)測(cè)
            2.7 雙峰駝FcRnα鏈和pIgR信號(hào)肽預(yù)測(cè)
            2.8 雙峰駝FcRnα鏈和pIgR磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)
            2.9 雙峰駝FcRnα鏈和pIgR一級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.10 雙峰駝FcRnα鏈和pIgR二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.11 雙峰駝FcRnα鏈和pIgR三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.12 克隆所得雙峰駝FcRnα鏈和pIgR CDS區(qū)的同源性分析
            2.13 克隆所得雙峰駝FcRnα鏈和pIgR的進(jìn)化樹構(gòu)建
        3 討論
            3.1 亞細(xì)胞定位
            3.2 一級(jí)結(jié)構(gòu)
            3.3 二級(jí)結(jié)構(gòu)
            3.4 三級(jí)結(jié)構(gòu)
            3.5 同源性分析
        4 小結(jié)
    第二章 PIGR和FCGRT在雙峰駝扁桃體中的表達(dá)特點(diǎn)及其與黏膜免疫的關(guān)系
        1 材料方法
            1.1 主要試劑
            1.2 主要儀器
            1.3 主要耗材
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 RNA提取
            2.2 逆轉(zhuǎn)錄
                2.2.1 總RNA中基因組DNA的去除
                2.2.2 逆轉(zhuǎn)錄
                2.2.3 c DNA的稀釋與保存
            2.3 熒光定量PCR檢測(cè)
                2.3.1 引物合成
                2.3.2 PCR反應(yīng)體系的配制
                2.3.3 熒光定量PCR循環(huán)條件
        3 結(jié)果
            3.1 雙峰駝扁桃體總RNA的提取
            3.2 FCGRT在雙峰駝扁桃體中的表達(dá)情況
            3.3 PIGR在雙峰駝扁桃體中的表達(dá)情況
        4 討論
        5 小結(jié)
    第三章 成年雙峰駝扁桃體中pIgR和FcRn的細(xì)胞分布及其與黏膜免疫的關(guān)系
        實(shí)驗(yàn)一 成年雙峰駝扁桃體中pIgR的細(xì)胞分布及其與黏膜免疫的關(guān)系
            1 材料與方法
                1.1 材料
                    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
                    1.1.2 藥品與試劑
                    1.1.3 主要儀器設(shè)備
                1.2 方法
                    1.2.1 樣品采集
                    1.2.2 石蠟切片
                    1.2.3 間接免疫組織化學(xué)（SABC）染色
                    1.2.4 數(shù)據(jù)的獲取及分析
            2 結(jié)果
                2.1 同一器官不同區(qū)域pIgR陽性細(xì)胞密度的比較
                2.2 不同器官同一區(qū)域pIgR陽性細(xì)胞密度的比較
                    2.2.1 濾泡區(qū)
                    2.2.2 濾泡間區(qū)
                    2.2.3 上皮下區(qū)
                    2.2.4 網(wǎng)狀上皮下區(qū)
                    2.2.5 腺體周圍區(qū)
            3 討論
            4.小結(jié)
        實(shí)驗(yàn)二 成年雙峰駝扁桃體中FcRn的細(xì)胞分布及其與黏膜免疫的關(guān)系
            1 材料與方法
            2 結(jié)果
                2.1 同一器官不同區(qū)域FcRn陽性細(xì)胞密度的比較
                2.2 不同器官同一區(qū)域FcRn陽性細(xì)胞密度的比較
                    2.2.1 濾泡區(qū)
                    2.2.2 濾泡間區(qū)
                    2.2.3 網(wǎng)狀上皮下區(qū)
                    2.2.4 腺體周圍區(qū)
                    2.2.5 上皮下區(qū)
            3 討論
            4 小結(jié)
        實(shí)驗(yàn)三 成年雙峰駝扁桃體同部位pIgR和FcRn陽性細(xì)胞的分布及其與黏膜免疫的關(guān)系
            1 材料與方法
            2 結(jié)果
                2.1 同器官同區(qū)域pIgR和FcRn陽性細(xì)胞密度比較
                    2.1.1 腭扁桃體
                    2.1.2 咽扁桃體
                    2.1.3 會(huì)厭扁桃體
                    2.1.4 軟腭扁桃體
                    2.1.5 咽鼓管扁桃體
                    2.1.6 舌扁桃體
            3 討論
            4 小結(jié)
第三部分 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3857783