在本實驗室近期系列雞錳營養(yǎng)研究成果的基礎(chǔ)上,本論文采用Caco-2細胞模型進行四個試驗,研究Caco-2細胞對不同絡(luò)合強度有機錳與無機錳的吸收特點及差異,并進一步探討其吸收的分子機制。 試驗一首先構(gòu)建Caco-2體外細胞模型,將Caco-2細胞接種于Transwell細胞轉(zhuǎn)運培養(yǎng)槽的聚碳酸酯微孔濾膜上,在37℃C和5%CO2濃度培養(yǎng)條件下培養(yǎng)21d,細胞跨膜電阻值達到659Ω·cm2,腸腔側(cè)(AP)堿性磷酸酶活性顯著高于基底側(cè)(BL)酶活性(P<0.01)。表明本實驗室構(gòu)建的Caco-2細胞模型在形態(tài)上與小腸上皮細胞相似,細胞已產(chǎn)生極性,且細胞間已形成緊密連接,可作為小腸吸收的體外模型。 試驗二采用Caco-2細胞模型研究無機錳的吸收特點,共包括2個試驗。試驗1研究無機硫酸錳在Caco-2細胞中吸收隨時間變化的規(guī)律,根據(jù)錳的吸收轉(zhuǎn)運與孵育時間的曲線關(guān)系,在二者的線性范圍內(nèi)確定細胞最佳孵育時間,為在細胞最敏感狀態(tài)下研究錳的吸收提供試驗依據(jù)。采用單因子完全隨機試驗設(shè)計。設(shè)細胞孵育時間分別為0、10、20、40、60、80、100和120min共8個處理組。每個處理6個重復(fù),分別研究不...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
附表
摘要
Abstract
目錄
表目錄
圖目錄
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 礦物元素吸收的研究方法
        1.1.1 體內(nèi)法
        1.1.2 體外法
        1.1.3 同位素示蹤技術(shù)
    1.2 錳吸收及其機制研究進展
        1.2.1 錳的吸收、代謝及排泄
        1.2.2 錳的吸收特點及方式
        1.2.3 錳吸收分子機制的研究進展
        1.2.4 有機錳等有機微量元素吸收機制假說
    1.3 本研究的立體依據(jù)和研究目的
    1.4 本研究的技術(shù)路線
第二章 Caco-2細胞吸收模型的構(gòu)建及評估
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 試驗儀器與材料
        2.2.2 試驗方法
        2.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 細胞形態(tài)
        2.3.2 跨膜電阻值TEER
        2.3.3 ALP活性
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 Caco-2細胞對無機錳的吸收特點
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 試驗設(shè)計與處理
        3.2.2 動物與飼糧
        3.2.3 Caco-2細胞培養(yǎng)與處理
        3.2.4 樣品采集與制備
        3.2.5 樣品分析
    3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 28日齡肉公雞小腸段食糜上清中錳含量(試驗1)
        3.4.2 Caco-2細胞在不同時間對無機硫酸錳的吸收和攝取(試驗2)
        3.4.3 Caco-2細胞對無機硫酸錳的吸收及其動力學(xué)(試驗3)
        3.4.4 添加錳對Caco-2細胞中DMT1和FPN1 mRNA表達的影響
    3.5 討論
        3.5.1 Caco-2細胞對無機錳吸收轉(zhuǎn)運最佳孵育時間的確定
        3.5.2 Caco-2細胞對無機錳的吸收及其動力學(xué)
        3.5.3 無機錳對Caco-2細胞中DMT1和FPN1 mRNA表達的影響
    3.6 小結(jié)
第四章 Caco-2細胞對不同形態(tài)錳的吸收特點
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 試驗設(shè)計與處理
        4.2.2 Caco-2細胞培養(yǎng)與處理
        4.2.3 樣品采集與制備
        4.2.4 樣品分析
    4.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 Caco-2細胞對不同形態(tài)錳的吸收及其動力學(xué)
        4.4.2 Caco-2細胞對不同形態(tài)錳的攝取及其動力學(xué)
        4.4.3 Caco-2細胞對不同形態(tài)錳的轉(zhuǎn)運及其動力學(xué)
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第五章 Caco-2細胞對不同形態(tài)錳吸收的分子機制
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 試驗儀器與材料
        5.2.2 試驗設(shè)計與處理
        5.2.3 Caco-2細胞培養(yǎng)與處理
        5.2.4 樣品采集與制備
        5.2.5 樣品分析
    5.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 Caco-2細胞對不同形態(tài)錳的吸收
        5.4.2 不同形態(tài)錳對Caco-2細胞中DMT1和FPN1 mRNA表達的影響
        5.4.3 不同形態(tài)錳對Caco-2細胞中B⁰AT1和LAT2 mRNA表達的影響
        5.4.4 不同形態(tài)錳對Caco-2細胞中rBAT和y⁺LAT1 mRNA表達的影響
        5.4.5 不同形態(tài)錳對Caco-2細胞中EAAT3 mRNA表達的影響
    5.5 討論
    5.6 小結(jié)
第六章 主要結(jié)論、突出創(chuàng)新點及有待進一步研究的問題
    主要結(jié)論
    突出創(chuàng)新點
    有待進一步研究的問題
附表
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3857159