本研究旨在探索c-KIT基因及SCF基因在不同毛色山羊皮膚中的表達及與成熟黑素細胞數量關系，并篩選出與山羊毛色相關的c-KIT基因及其配體SCF基因的SNPs標記，以期對毛色性狀的分子育種實踐提供理論基礎。 研究中對SCF基因mRNA存在的不同剪接類型進行探究，發(fā)現存在可溶型（KC794711.1），跨膜型（KC794712.1）和類跨膜型（KC794713.1）三種剪接形式。選擇TYR基因作為成熟黑素細胞的標志分子，利用實時熒光定量PCR技術對黑色和白色山羊皮膚組織中c-KIT、SCF以及TYR等毛色相關基因表達量進行研究，結果發(fā)現：黑色被毛山羊皮膚組織中TYR基因mRNA表達量是白色被毛山羊的8.280倍；c-KIT基因mRNA表達量是白色被毛山羊的1.255倍；可溶性SCF基因mRNA表達量是白色被毛山羊的0.267倍；跨膜型SCF基因mRNA表達量是白色被毛山羊的0.874倍；類跨膜型SCF基因mRNA表達量是白色被毛山羊的0.103倍。可溶性SCF和類跨膜型SCF基因mRNA表達量之和在黑白山羊個體間差異顯著（P<0.05），可能與黑白毛色的形成有關。 本研究利用免疫組...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
1. 引言
    1.1. 哺乳動物的毛色
    1.2. 山羊毛色性狀及其價值
    1.3. 被毛顏色的形成
    1.4. “上位白”基因座位和 SCF/c-KIT 信號途徑
    1.5. SCF/c-KIT 信號途徑參與影響哺乳動物毛色的形成
    1.6. SCF/c-KIT 信號途徑的重要功能和研究現狀
    1.7. 本課題組對山羊 SCF/c-KIT 信號途徑研究成果
    1.8. 本研究的目的、意義及主要內容
2. 材料與方法
    2.1. 試驗材料
        2.1.1. 試驗動物和樣本采集
        2.1.2. 主要試劑及溶液的配制
        2.1.3. 試驗過程中使用的設備及儀器
        2.1.4. 研究中使用的生物信息學軟件
    2.2. 試驗方法和步驟
        2.2.1. RNA 的提取
        2.2.2. RNA 的純化
        2.2.3. cDNA 第一鏈的合成
        2.2.4. RT-PCR 實驗引物的設計
        2.2.5. 熒光實時定量 PCR 實驗引物的設計
        2.2.6. PCR 反應體系與條件
        2.2.7. 標準品的制備
        2.2.8. 標準曲線建立和實時熒光定量 PCR
        2.2.9. 石蠟切片制作
        2.2.10. 免疫組織化學
        2.2.11. DNA 的提取
        2.2.12. DNA 濃度和純度的檢測及測定
        2.2.13. 篩選 SNPs 實驗 PCR 引物的設計
        2.2.14. PCR 擴增、測序以及數據分析
3. 結果與分析
    3.1. SCF 基因不同剪接變體及 c-KIT，SCF 與 TYR 基因表達關系研究
        3.1.1. 山羊皮膚組織 mRNA 的提取和純化
        3.1.2. SCF 基因不同剪接變體的 PCR 擴增結果
        3.1.3. 熒光定量 PCR 實驗中各待測基因的擴增和克隆
        3.1.4. 陽性克隆的鑒定
        3.1.5. Real-time qPCR 檢測 TYR, c-KIT 及各型 SCF 基因在黑白山羊皮膚中的表達
        3.1.6. 不同山羊皮膚中 c-KIT 基因及各型 SCF 基因與 TYR 基因 mRNA 變化規(guī)律
        3.1.7. c-KIT 基因和 SCF 基因與 TYR 基因表達關系
    3.2. c-KIT 在不同毛色山羊皮膚分布規(guī)律研究
    3.3. c-KIT 基因和 SCF 基因組序列多態(tài)性研究
        3.3.1. DNA 的提取
        3.3.2. PCR 擴增結果
        3.3.3. 測序結果比對分析
        3.3.4. 研究中發(fā)現的 c-SNPs
        3.3.5. c-KIT 基因上 4 個 cSNPs 的遺傳多樣性分析
        3.3.6. c-KIT 基因多態(tài)位點的遺傳多樣性分析
        3.3.7. SCF 基因多態(tài)位點的遺傳多樣性分析
4. 討論
    4.1. 實驗過程討論
        4.1.1. 樣品采集和核酸提取
        4.1.2. PCR 擴增
        4.1.3. 實時熒光定量 PCR 試驗
        4.1.4. 毛囊切片制備
        4.1.5. IHC 實驗
    4.2. 實驗結果分析討論
        4.2.1. SCF 基因中的不同剪接變體及 c-KIT，SCF 與 TYR 基因表達定量
        4.2.2. c-KIT 的表達分布
        4.2.3. 多態(tài)位點的遺傳多樣性分析
5. 結論
參考文獻
作者簡歷
在讀期間已發(fā)表論文
致謝



本文編號：3854583