本研究旨在探索c-KIT基因及SCF基因在不同毛色山羊皮膚中的表達(dá)及與成熟黑素細(xì)胞數(shù)量關(guān)系，并篩選出與山羊毛色相關(guān)的c-KIT基因及其配體SCF基因的SNPs標(biāo)記，以期對(duì)毛色性狀的分子育種實(shí)踐提供理論基礎(chǔ)。 研究中對(duì)SCF基因mRNA存在的不同剪接類(lèi)型進(jìn)行探究，發(fā)現(xiàn)存在可溶型（KC794711.1），跨膜型（KC794712.1）和類(lèi)跨膜型（KC794713.1）三種剪接形式。選擇TYR基因作為成熟黑素細(xì)胞的標(biāo)志分子，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)黑色和白色山羊皮膚組織中c-KIT、SCF以及TYR等毛色相關(guān)基因表達(dá)量進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：黑色被毛山羊皮膚組織中TYR基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的8.280倍；c-KIT基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的1.255倍；可溶性SCF基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的0.267倍；跨膜型SCF基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的0.874倍；類(lèi)跨膜型SCF基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的0.103倍�？扇苄許CF和類(lèi)跨膜型SCF基因mRNA表達(dá)量之和在黑白山羊個(gè)體間差異顯著（P<0.05），可能與黑白毛色的形成有關(guān)。 本研究利用免疫組...

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 引言
    1.1. 哺乳動(dòng)物的毛色
    1.2. 山羊毛色性狀及其價(jià)值
    1.3. 被毛顏色的形成
    1.4. “上位白”基因座位和 SCF/c-KIT 信號(hào)途徑
    1.5. SCF/c-KIT 信號(hào)途徑參與影響哺乳動(dòng)物毛色的形成
    1.6. SCF/c-KIT 信號(hào)途徑的重要功能和研究現(xiàn)狀
    1.7. 本課題組對(duì)山羊 SCF/c-KIT 信號(hào)途徑研究成果
    1.8. 本研究的目的、意義及主要內(nèi)容
2. 材料與方法
    2.1. 試驗(yàn)材料
        2.1.1. 試驗(yàn)動(dòng)物和樣本采集
        2.1.2. 主要試劑及溶液的配制
        2.1.3. 試驗(yàn)過(guò)程中使用的設(shè)備及儀器
        2.1.4. 研究中使用的生物信息學(xué)軟件
    2.2. 試驗(yàn)方法和步驟
        2.2.1. RNA 的提取
        2.2.2. RNA 的純化
        2.2.3. cDNA 第一鏈的合成
        2.2.4. RT-PCR 實(shí)驗(yàn)引物的設(shè)計(jì)
        2.2.5. 熒光實(shí)時(shí)定量 PCR 實(shí)驗(yàn)引物的設(shè)計(jì)
        2.2.6. PCR 反應(yīng)體系與條件
        2.2.7. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.2.8. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)建立和實(shí)時(shí)熒光定量 PCR
        2.2.9. 石蠟切片制作
        2.2.10. 免疫組織化學(xué)
        2.2.11. DNA 的提取
        2.2.12. DNA 濃度和純度的檢測(cè)及測(cè)定
        2.2.13. 篩選 SNPs 實(shí)驗(yàn) PCR 引物的設(shè)計(jì)
        2.2.14. PCR 擴(kuò)增、測(cè)序以及數(shù)據(jù)分析
3. 結(jié)果與分析
    3.1. SCF 基因不同剪接變體及 c-KIT，SCF 與 TYR 基因表達(dá)關(guān)系研究
        3.1.1. 山羊皮膚組織 mRNA 的提取和純化
        3.1.2. SCF 基因不同剪接變體的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.3. 熒光定量 PCR 實(shí)驗(yàn)中各待測(cè)基因的擴(kuò)增和克隆
        3.1.4. 陽(yáng)性克隆的鑒定
        3.1.5. Real-time qPCR 檢測(cè) TYR, c-KIT 及各型 SCF 基因在黑白山羊皮膚中的表達(dá)
        3.1.6. 不同山羊皮膚中 c-KIT 基因及各型 SCF 基因與 TYR 基因 mRNA 變化規(guī)律
        3.1.7. c-KIT 基因和 SCF 基因與 TYR 基因表達(dá)關(guān)系
    3.2. c-KIT 在不同毛色山羊皮膚分布規(guī)律研究
    3.3. c-KIT 基因和 SCF 基因組序列多態(tài)性研究
        3.3.1. DNA 的提取
        3.3.2. PCR 擴(kuò)增結(jié)果
        3.3.3. 測(cè)序結(jié)果比對(duì)分析
        3.3.4. 研究中發(fā)現(xiàn)的 c-SNPs
        3.3.5. c-KIT 基因上 4 個(gè) cSNPs 的遺傳多樣性分析
        3.3.6. c-KIT 基因多態(tài)位點(diǎn)的遺傳多樣性分析
        3.3.7. SCF 基因多態(tài)位點(diǎn)的遺傳多樣性分析
4. 討論
    4.1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程討論
        4.1.1. 樣品采集和核酸提取
        4.1.2. PCR 擴(kuò)增
        4.1.3. 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 試驗(yàn)
        4.1.4. 毛囊切片制備
        4.1.5. IHC 實(shí)驗(yàn)
    4.2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析討論
        4.2.1. SCF 基因中的不同剪接變體及 c-KIT，SCF 與 TYR 基因表達(dá)定量
        4.2.2. c-KIT 的表達(dá)分布
        4.2.3. 多態(tài)位點(diǎn)的遺傳多樣性分析
5. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷
在讀期間已發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3854583