馬傳染性貧血病毒疫苗株EIAV FDDV13 及其感染性克隆激活宿主細(xì)胞固有免疫應(yīng)答的比較研究
發(fā)布時(shí)間：2023-09-16 10:46
馬傳染性貧血病毒(Equine infectious anemia virus, EIAV)是嚴(yán)重危害馬屬動(dòng)物的慢病毒。上世紀(jì)七十至八十年代,哈爾濱獸醫(yī)研究所沈榮顯院士等通過(guò)獨(dú)特的EIAV強(qiáng)毒致弱技術(shù)路線(xiàn),對(duì)EIAV的強(qiáng)毒株進(jìn)行有效地致弱。得到的EIAV弱毒疫苗,是可誘導(dǎo)馬屬動(dòng)物產(chǎn)生良好免疫保護(hù)并唯一被成功大規(guī)模應(yīng)用的慢病毒疫苗。對(duì)該慢病毒疫苗誘導(dǎo)免疫保護(hù)機(jī)制的研究,有助于破解一直困擾科學(xué)界的如何誘導(dǎo)慢病毒保護(hù)性免疫的關(guān)鍵問(wèn)題,具有重要的科學(xué)意義。前期開(kāi)展的工作中,我們發(fā)現(xiàn)基于EIAV中國(guó)疫苗株EIAVFDDV13制備的疫苗感染性克隆毒株EIAVFDDV3-8未能復(fù)制該疫苗株誘導(dǎo)良好保護(hù)性免疫的能力。考慮到固有免疫激活與后續(xù)特異性免疫應(yīng)答建立間存在的密切相關(guān)性,本研究將對(duì)EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8兩毒株激活宿主細(xì)胞固有免疫應(yīng)答的特性進(jìn)行比較研究,嘗試對(duì)二者在誘導(dǎo)保護(hù)性免疫能力上的差異進(jìn)行解析。 本研究中,我們選擇包括TLR-2\3\4、TLR-6\7\8、TLR-9、INF-α、INF-β、IL-6和TNF-α等在內(nèi)的分子作為評(píng)價(jià)固有免疫激活差異的指標(biāo)。原因在于,首先...
【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
1.1 EIAV生物學(xué)特征
1.1.1 EIAV基因組形態(tài)結(jié)構(gòu)及構(gòu)成
1.1.2 EIAV臨床癥狀和免疫反應(yīng)
1.1.3 EIAV的細(xì)胞嗜性
1.2 EIAV弱毒疫苗株和感染性克隆
1.2.1 EIAV弱毒疫苗株的致弱路線(xiàn)
1.2.2 EIAV感染性克隆
1.3 抗病毒感染的天然免疫
1.3.1 Toll樣受體
1.4 其他固有免疫的效應(yīng)分子
1.5 本研究的目的與意義
第二章 材料與方法
2.1 材料
2.1.1 細(xì)胞和病毒
2.1.2 質(zhì)粒和菌株
2.1.3 主要試劑
2.1.4 主要儀器
2.1.5 熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)
2.2 方法
2.2.1 檢測(cè)病毒Reverse Transcriptase活性
2.2.2 細(xì)胞DNA的提取
2.2.3 細(xì)胞RNA的提取
2.2.4 病毒RNA的提取
2.2.5 細(xì)胞內(nèi)病毒載量及整合效率的定量分析
2.2.6 病毒在馬巨噬細(xì)胞上誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
2.2.7 應(yīng)用相對(duì)熒光定量方法檢測(cè)固有免疫相關(guān)分子表達(dá)
2.2.8 ELISA檢測(cè)蛋白表達(dá)量
2.2.9 確定病毒感染細(xì)胞的TCIDso
第三章 結(jié)果
3.1 病毒感染劑量的確定
3.2 EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8二者致細(xì)胞凋亡作用的比較
3.3 EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8二者在EMDMs內(nèi)的復(fù)制動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)
3.4 EMDMs感染EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8后TLRs的激活現(xiàn)象
3.5 EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8感染宿主細(xì)胞EMDMs后細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型干擾素的表達(dá)差異分析
3.6 EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8感染宿主細(xì)胞EMDMs后TNF-A和IL-6的表達(dá)情況
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷
本文編號(hào)：3846878
【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
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摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
1.1 EIAV生物學(xué)特征
1.1.1 EIAV基因組形態(tài)結(jié)構(gòu)及構(gòu)成
1.1.2 EIAV臨床癥狀和免疫反應(yīng)
1.1.3 EIAV的細(xì)胞嗜性
1.2 EIAV弱毒疫苗株和感染性克隆
1.2.1 EIAV弱毒疫苗株的致弱路線(xiàn)
1.2.2 EIAV感染性克隆
1.3 抗病毒感染的天然免疫
1.3.1 Toll樣受體
1.4 其他固有免疫的效應(yīng)分子
1.5 本研究的目的與意義
第二章 材料與方法
2.1 材料
2.1.1 細(xì)胞和病毒
2.1.2 質(zhì)粒和菌株
2.1.3 主要試劑
2.1.4 主要儀器
2.1.5 熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)
2.2 方法
2.2.1 檢測(cè)病毒Reverse Transcriptase活性
2.2.2 細(xì)胞DNA的提取
2.2.3 細(xì)胞RNA的提取
2.2.4 病毒RNA的提取
2.2.5 細(xì)胞內(nèi)病毒載量及整合效率的定量分析
2.2.6 病毒在馬巨噬細(xì)胞上誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
2.2.7 應(yīng)用相對(duì)熒光定量方法檢測(cè)固有免疫相關(guān)分子表達(dá)
2.2.8 ELISA檢測(cè)蛋白表達(dá)量
2.2.9 確定病毒感染細(xì)胞的TCIDso
第三章 結(jié)果
3.1 病毒感染劑量的確定
3.2 EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8二者致細(xì)胞凋亡作用的比較
3.3 EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8二者在EMDMs內(nèi)的復(fù)制動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)
3.4 EMDMs感染EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8后TLRs的激活現(xiàn)象
3.5 EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8感染宿主細(xì)胞EMDMs后細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型干擾素的表達(dá)差異分析
3.6 EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8感染宿主細(xì)胞EMDMs后TNF-A和IL-6的表達(dá)情況
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
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作者簡(jiǎn)歷
本文編號(hào)：3846878
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